[发明专利]转基因玉米98140结构特异定量PCR精准检测的引物和探针及方法

权利要求书

1.转基因玉米98140结构特异性定量PCR精准检测的引物和探针，其特征在于,

用于检测pinⅡ终止子与zm-hra gene相连位置的引物和探针如下：

上游引物序列，zm-F：5'-TGGCCAATCCAGAAGATGGA-3'；

下游引物序列，zm-R：5'-TGGTGATGGCAGGACTGTGT-3'；

荧光探针序列，zm-P：5'-FAM-AAGTCTAGGTTAACTGACTAGC-TAMRA-3'；

用于检测Gate4621gene与pinⅡ终止子相接处的引物和探针如下：

上游引物序列，gat-F：5'-TTGGGATTCAGTGAGCAAGGA-3'；

下游引物序列，gat-R：5'-CCAATCCAGAAGATGGACAAGTCT-3'；

荧光探针序列，gat-P：5'-FAM-AGGTGTTCGATACTCCTCCAGTTGGACCTC-TAMRA-3'。

2. 转基因玉米98140结构特异性定量PCR精准检测方法，其特征在于,包括以下步骤：检测pinⅡ终止子与zm-hra gene相连位置：

（a1）合成以下引物及与引物配合使用的荧光探针，

上游引物序列，zm-F：5'-TGGCCAATCCAGAAGATGGA-3'

下游引物序列，zm-R：5'-TGGTGATGGCAGGACTGTGT-3'

荧光探针序列，zm-P：5'-FAM-AAGTCTAGGTTAACTGACTAGC-TAMRA-3'；

（a2）制备98140品系的DNA稀释液；

（a3）配制PCR反应体系；

（a4）定量PCR检测。

3. 根据权利要求2所述的转基因玉米98140结构特异性定量PCR精准检测方法，其特征在于，检测Gate4621gene与pinⅡ终止子相接处：

（b1）合成以下引物及与引物配合使用的荧光探针，

上游引物序列，gat-F：5'-TTGGGATTCAGTGAGCAAGGA-3'

下游引物序列，gat-R：5'-CCAATCCAGAAGATGGACAAGTCT-3'

荧光探针序列，gat-P：5'-FAM-AGGTGTTCGATACTCCTCCAGTTGGACCTC-TAMRA-3'；

（b2）制备98140品系的DNA稀释液；

（b3）配制PCR反应体系；

（b4）定量PCR检测。

4. 根据权利要求3所述的转基因玉米98140结构特异性定量PCR精准检测方法，其特征在于，步骤（a1）和（b1）中合成的引物及荧光探针的浓度均为10μmol/l，步骤（a2）和（b2）中制备的DNA稀释液的浓度为50ng/μl。

5. 根据权利要求4所述的转基因玉米98140结构特异定量PCR精准检测方法，其特征在于，步骤（a3）和（b3）中所述的配制PCR反应体系，即将DNA稀释液加入到20μl反应体系中，所述20μl的反应体系包括以下组分：

Taqman Master mix（2×）                 10μl

上游引物                                 1μl

下游引物                                 1μl

荧光探针                                 0.5μl

DNA稀释液                               3.0μl

50 ROX                                   0.4μl

水                                       4.1μl。

6. 根据权利要求3或5所述的转基因玉米98140结构特异性定量PCR精准检测方法，其特征在于，所述PCR反应条件为：95℃预变性10min，1个循环；95℃变性15s，57℃退火60s，45个循环。