[发明专利]转基因玉米98140结构特异定量PCR精准检测的引物和探针及方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及基因的定量的分析方法。

背景技术

国际上很多国家对转基因产品实施限量标识和进口，而我国尚无具体的转基因产品标识阈值。为了打破欧盟等国家和地区设置的转基因产品贸易技术壁垒，同时弥补和完善我国转基因生物及产品定量检测技术体系，更好地保护消费者对转基因产品的知情权和选择权，建立一种新型转基因玉米98140结构特异定量PCR精准检测方法已成为必要。

目前关于转基因玉米98140的检测技术，主要集中在普通定性PCR分析方法和标准，尚无关于检测转基因玉米98140及产品的结构特异性某特定位点（基因序列）的定量PCR精准检测技术。

发明内容

本发明的目的主要是提供一种扩增效率高、准确度高的检测转基因玉米98140及产品的结构特异性某特定位点的定量PCR精准检测技术。

本发明通过下述技术方案实现：

转基因玉米98140结构特异性定量PCR精准检测的引物和探针： 

上游引物序列，zm-F：5'-TGGCCAATCCAGAAGATGGA-3'；

下游引物序列，zm-R：5'-TGGTGATGGCAGGACTGTGT-3'；

荧光探针序列，zm-P：5'-FAM-AAGTCTAGGTTAACTGACTAGC-TAMRA-3'。实现对pinⅡ终止子与zm-hra gene相连位置核酸片段的检测。

转基因玉米98140结构特异性定量PCR精准检测的引物和探针：

上游引物序列，gat-F：5'-TTGGGATTCAGTGAGCAAGGA-3'；

下游引物序列，gat-R：5'-CCAATCCAGAAGATGGACAAGTCT-3'；

荧光探针序列，gat-P：5'-FAM-AGGTGTTCGATACTCCTCCAGTTGGACCTC-TAMRA-3'。实现对Gate4621gene与pinⅡ终止子相接处核酸片段的检测。

上述转基因玉米98140结构特异性定量PCR精准检测方法，包括以下步骤：当检测pinⅡ终止子与zm-hra gene相连位置核酸片段时，具体步骤如下：

（a1）合成以下引物及与引物配合使用的荧光探针，

上游引物序列，zm-F：5'-TGGCCAATCCAGAAGATGGA-3'

下游引物序列，zm-R：5'-TGGTGATGGCAGGACTGTGT-3'

荧光探针序列，zm-P：5'-FAM-AAGTCTAGGTTAACTGACTAGC-TAMRA-3'；

（a2）制备98140品系的DNA稀释液；

（a3）配制PCR反应体系；

（a4）定量PCR检测。

当检测Gate4621gene与pinⅡ终止子相接处核酸片段时，具体步骤如下：

（b1）合成以下引物及与引物配合使用的荧光探针，

上游引物序列，gat-F：5'-TTGGGATTCAGTGAGCAAGGA-3'

下游引物序列，gat-R：5'-CCAATCCAGAAGATGGACAAGTCT-3'

荧光探针序列，gat-P：5'-FAM-AGGTGTTCGATACTCCTCCAGTTGGACCTC-TAMRA-3'；

（b2）制备98140品系的DNA稀释液；

（b3）配制PCR反应体系；

（b4）定量PCR检测。

进一步地，步骤（a1）和（b1）中合成的引物及荧光探针的浓度均为10μmol/l，步骤（a2）和（b2）中制备的DNA稀释液的浓度为50ng/μl。

再进一步地，步骤（a3）和（b3）中所述的配制PCR反应体系，即将DNA稀释液加入到20μl反应体系中，所述20μl的反应体系包括以下组分：

Taqman Master mix（2×）                 10μl

上游引物                                 1μl

下游引物                                 1μl

荧光探针                                 0.5μl

DNA稀释液                               3.0μl