[发明专利]金鱼心脏细胞系及其应用

权利要求书

1.一种金鱼心脏细胞系GH，其保藏编号为CGMCC No.9334。

2.根据权利要求1所述的金鱼心脏细胞系GH，其特征在于，所述细胞系具有以下生物学特性：

(1)细胞呈现典型的上皮细胞形态，连续传代培养50代仍保持该形态特点；

(2)细胞具有较强的增殖能力，连续培养50代仍保持该增殖和生长特性。

3.一种权利要求1所述的金鱼心脏细胞系GH的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)取金鱼一条，用医用酒精浸泡1-5min，于无菌条件下剪取金鱼的心脏，放于浓度为1000u/ml的青霉素-链霉素双抗溶液中；

(2)用解剖刀切割成小块，胰酶消化液消化5min，用培养基重悬，离心，弃掉上清液，再用培养基进行重悬，离心，弃掉上清，最后加入培养基，重悬混匀；

(3)将步骤(2)制备的重悬混匀液加入到细胞培养瓶中，25℃培养箱中培养；

(4)待细胞铺板到1/3的时候，更换新鲜的培养基一次；

(5)待细胞铺满板子，用胰酶消化液进行初步消化后，加入新的培养基进行培养；

(6)传代3次后，冻存，复苏后能够继续稳定增殖生长，该细胞系命名为GH。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述培养基为含有浓度为100u/ml青霉素-链霉素双抗溶液和20﹪特级胎牛血清的M199培养基。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述胰酶消化液的配制：磷酸氢二钠2.3g，磷酸二氢钾0.1g，氯化钠8.0g，氯化钾0.2g，EDTA 0.2g，胰酶0.6g，水1000ml。

6.权利要求1所述的金鱼心脏细胞系GH作为研究水产动物病毒宿主细胞的应用。

7.权利要求1所述的金鱼心脏细胞系GH在水产动物病毒分离中的应用。