[发明专利]获得高产稳定表达重组抗体的骨髓瘤细胞株的方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种获得高产稳定表达细胞株的方法，该方法获得的细胞株在灌流发酵工艺中具有优越生产性能，可在不同的工业规模中生产治疗性抗体。

背景技术

目前治疗性抗体药物是生物制药的一个重要类别，一些治疗性抗体已经被批准注册用于治疗癌症、自身免疫性疾病和其他慢性疾病，几十种重组抗体正处于临床开发的不同阶段 (Reichert JM, MAbs 2012, May-June, 4(3):413-5; Reichert JM, Dhimolea E, Drug Discovery Today 2012, Sept, 17(17-18): 954-63; Biologic Medicines in Development, Phrma Report 2013, www.phrma.com)。通常患者每次剂量需要数百毫克的治疗性抗体，因此目前的产能需求巨大。

重组治疗性抗体是一种复杂的糖蛋白，不得不通过哺乳动物细胞培养生产(Wurm FM. Nat Biotechnology 2004, 22:1393-1398; Barnes L, Dickson A, CurrOpinBiotechnol 2006, 17:381-386)。对生物制药行业来说哺乳动物细胞的大规模培养遭遇了诸多挑战，虽然重组抗体在理化特性方面已经取得了巨大的进步，但是治疗性抗体分子的特性由工艺过程决定的观念仍然被普遍接受。生产工艺的任何变化，例如发酵规模、细胞培养基、细胞传代次数等，都可能会影响产品的性能(Demonstration of comparability of human biological products, including therapeutic biotechnology-derived products, Center for Biologics Evaluation and Research (CBER), Center for Drug Evaluation and Research (CDER) April 1996. www.fda.gov ; EU Guideline on Comparability of Medicinal Products containing Biotechnology-derived Proteins as Active Substances: Quality issues (CPMP December 2003) www.emea.europa.eu ; ICH Q5E: Comparability of Biotechnological/Biological Products Subject to Changes in their Manufacturing Process. EU: Adopted by CMPM, December 1, 2004, CPMP/ICH/5721/03, date for coming into operation: June 2005; MHLW: Adopted 26 April 2005, PFSB/ELD Notification No. 0426001; FDA: Published in the Federal Register, Vol. 70, No. 125, June 30, 2005; 37861-2. www.ich.org)。

哺乳动物细胞大规模培养生产治疗性抗体必须在无血清培养基中进行。无蛋白培养基已经用于生物制品的生产，例如生产重组抗体的NS0细胞株已成功地在无蛋白培养基PFHMII中生长(WO 2004/038010 A1)。然而，适应无血清培养基和在无血清培养基中长时间发酵通常伴随着细胞系生产力的损失(Barnes L, et al., Biotechnol Bioeng 2004, 81: 631-639)。灌流发酵生产工艺具有高密度培养及获得高浓度抗体收获液的潜能，然而这种长时间的高密度细胞培养需要稳定的高表达细胞株来真正地优化抗体的生产。