[发明专利]基因组DNA测序文库液相杂交诱捕富集溶液及杂交方法

权利要求书

1.一种基因组DNA测序文库杂交诱捕富集溶液，其特征在于其包含磷酸钠缓冲液，柠檬酸钠缓冲液(SSC)，SDS，EDTA及Denhardt溶液，所述的组分独立包装。

2.根据权利要求1所述的基因组DNA测序文库杂交诱捕富集溶液，基因组DNA测序文库杂交诱捕富集溶液含有或者不含有其它组分。

3.根据权利要求1所述的基因组DNA测序文库杂交诱捕富集溶液，所述的磷酸钠缓冲液的是0.4-0.6M磷酸钠缓冲液，其pH值介于6.8-7.2之间。

4.根据权利要求1所述的基因组DNA测序文库杂交诱捕富集溶液，SDS的浓度是0.8-1.2％；EDTA的浓度是1-3mM。

5.根据权利要求1所述的基因组DNA测序文库杂交诱捕富集溶液，所述的基因组DNA测序文库杂交诱捕富集溶液包括1份磷酸钠缓冲液，2份柠檬酸钠缓冲液(SSC)，1份SDS，1份EDTA及4份Denhardt溶液。

6.根据权利要求1所述的基因组DNA测序文库杂交诱捕富集溶液，1M磷酸钠缓冲液(pH7.0)的配方：57.7ml1M Na₂HPO₄与42.3ml1M NaH₂PO₄混合。

7.根据权利要求1所述的基因组DNA测序文库杂交诱捕富集溶液，20X SSC配方：3M NaCl，300mM柠檬酸钠；调节PH值至7.0。

8.根据权利要求1所述的基因组DNA测序文库杂交诱捕富集溶液，50X Denhardt溶液：该溶液中含有1％聚蔗糖(Ficoll，400型)，1％聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)，和1％牛血清白蛋白(BSA)。

9.一种杂交方法，其特征在于采用上述基因组DNA测序文库杂交诱捕富集溶液富集。

10.根据权利要求9所述的杂交方法，所述的杂交方法包括如下步骤：

(1)将基因组DNA片段化为350-550bp(机械破碎，如超声处理，水力剪切，或酶促片段化均可；其所需片段长度取决于后续拟采用的测序长度)；

(2)根据后续所使用的NGS测序平台按照标准实验流程制备基因组测序文库；

(3)将总量250-2000ng基因组测序文库池于0.2mL PCR管中真空高速干燥，此文库池中可混合带有不同索引序列接头的多个基因组测序文库样品；

(4)将以下成分加入已烘干的测序文库并静置10分钟使其充分溶解：

生物素修饰的单链核苷酸捕获探针3pMole2-5μg人类Cot-l DNA相应两端封闭聚合物混合物各1mM无核酸酶去离子水，将总体积补至10μL

(5)加入10μL上述基因组DNA测序文库杂交诱捕富集溶液，并用移液枪充分混合；

(6)将上述反应体系放入热循环仪运行下列程序：