[发明专利]心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1、试剂R2和标准品；

所述试剂R1包括组分及含量如下：

所述试剂R2包括组分及含量如下：

所述标准品包括6支不同浓度H-FABP重组蛋白、溶质及含量均相同的标准品溶液。

2.根据权利要求1所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1、试剂R2中的缓冲液包括MOPSO缓冲液、巴比妥缓冲液、DIPSO缓冲液、Tris缓冲液、MES缓冲液、盐酸溶液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1、试剂R2中的防腐剂包括叠氮化钠、硫柳汞、Proclin-300、苯酚中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其特征在于，试剂R1中，所述表面活性剂为非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性表面活性剂；

所述螯合剂包括乙二胺四乙酸二钠、氨基三乙酸、二亚乙基三胺五乙酸、二亚乙基三胺五乙酸盐中的一种或几种；

所述加速剂包括葡聚糖4000～12000中的一种或几种。

5.根据权利要求1所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中稳定剂包括无关蛋白、氨基酸、表面活性剂、助悬剂中的一种或几种；所述无关蛋白包括牛血清白蛋白或明胶；所述表面活性剂包括Tween20；所述助悬剂包括乙二醇、丙三醇、麦芽糖中的一种或几种；

所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硫酸钾、醋酸钠、醋酸钾中的一种或几种。

6.根据权利要求1所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述标准品中不同浓度H-FABP重组蛋白具体是指H-FABP重组蛋白的含量分别为0ng/ml、7.8ng/ml、15.5ng/ml、31ng/ml、62ng/ml、124ng/ml；所述溶质及含量为磷酸氢二钠1.5～3g/L、磷酸二氢钠2.5～5g/L、氯化钠30～80mmol/L、乙二胺四乙酸二钠30～80mmol/L、牛血清白蛋白0.5～1.5％、蔗糖1～5％、叠氮化钠0.5～1.5‰。

7.一种根据权利要求1～6中任一项所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述试剂R2的制备包括如下步骤：

步骤1：将抗人H-FABP抗体在pH值为4.0～6.0的溶液中进行酸化；

步骤2：将步骤1所得抗人H-FABP抗体溶液用碱溶液调节pH至7.4～8.2，加入粒径为100～300nm的聚乙烯基苄基氯胶乳悬浮溶液，在37℃孵育2～4小时；

步骤3：将步骤2所得悬浮溶液用pH为7.0～8.5的封闭液在37℃封闭5个小时以上；所述封闭液的溶剂为50mmol/L MES缓冲液，溶质及其在所述封闭液中的含量为牛血清白蛋白0.1mg/ml、氯化钠150mM；

步骤4：将步骤3所得悬浮溶液经离心或过滤后，取沉淀用含有稳定剂、无机盐、防腐剂的缓冲液洗涤分散即得；所述洗涤为高速冷冻离心机离心或者是用孔径小于100nm的中空纤维管状进行过滤。

8.根据权利要求7所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤1中抗人H-FABP抗体包括鼠抗人H-FABP抗体、兔抗人H-FABP抗体、羊抗人H-FABP抗体中的一种或多种；所述溶液包括甘氨酸缓冲液、盐酸溶液、MES缓冲液中的一种或多种。

9.根据权利要求7所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤2中聚乙烯基苄基氯胶乳悬浮溶液中溶剂为pH7.4～8.2的MOPSO缓冲液、DIPSO缓冲液或PBS缓冲液中的一种或多种。

10.根据权利要求7所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤4中稳定剂包括无关蛋白、氨基酸、表面活性剂、助悬剂中的一种或几种；所述防腐剂包括叠氮化钠、硫柳汞、Proclin-300、苯酚中的一种或几种；所述缓冲液包括MOPSO缓冲液、巴比妥缓冲液、DIPSO缓冲液、Tris缓冲液、MES缓冲液、盐酸溶液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种。