[发明专利]心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及其制备方法，具体涉及一种利用乳胶增强免疫比浊法技术提高心脏型脂肪酸结合蛋白检测灵敏度的检测试剂盒。

背景技术

急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是严重威胁人类健康的疾病之一，近年来，其发病率及死亡率逐年上升，且有越来越年轻化的趋势。据统计，在中国每年超过100万人死于AMI。现代治疗学认为，AMI发病后能迅速得到确诊并进行再灌注治疗，对于降低死亡率及改善预后十分重要。

在完全排除急性心肌梗死(AMI)之前，住院患者通常至少要接受6～12小时的检测，才能考虑出院。因此，许多医院承认大多数此类患者(74％～88％)，需要进一步的检测，这就给临床检测AMI提出了非常巨大的市场和挑战。迄今为止，临床应用的检测指标如肌钙蛋白I(cTnI)、心肌型肌酸激酶同工酶(CKMB)，在AMI发病后的早期(2h～4h)阳性率不高；肌红蛋白(MB)虽出现较早，但特异性较差。心脏型脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid binding protein，H-FABP)是近些年推出的心肌标志物，受到业界重视。

脂肪酸结合蛋白(FABP)是一种小分子蛋白质(相对分子量为15000)，存在于机体多种组织细胞的胞浆中，主要担负着结合脂肪酸并调节其细胞内代谢的功能。按照组织特异性不同可以分为心脏型(H-FABP)、小肠型(I-FABP)、肝脏型(L-FABP)、脂肪细胞型(A-FABP)、脑细胞型(B-FABP)、肾脏型(K-FABP)、骨骼肌型(S-FABP)、牛皮癣相关性(PA-FABP)、表皮型(E-FABP)9种亚型。它们分布于哺乳动物的心脏、小肠、肝脏、脂肪组织、脑、表皮等组织细胞中，在蛋白质序列上显示有很大的同源性。9种FABPs都有不同的表达模式，这些蛋白有多种功能，包括促进细胞摄取和运输脂肪酸，寻找参与特殊新陈代谢途径的脂肪酸，参与基因表达和细胞生长的调节。

H-FABP在心肌损伤后6～8小时左右达到浓度峰值，然后在24～30小时左右恢复至正常水平。如此迅速恢复至正常水平得益于高肾清除率，这意味着H-FABP不仅能够用作AMI早期标志物，还是理想的心肌梗死复发诊断标志物。

早期诊断AMI及评估心肌梗死面积大小新的心肌标记物必须在病人胸痛开始1～2h内有较高的敏感度,也即在心肌发生不可逆损伤前。有研究表明，在急性心肌梗死患者发病极早期，胞浆中的H-FABP会迅速释放到血浆中，能够直接提示心脏患者的发病情况，故可作为早期诊断心肌梗死程度的有效标志物，且因为其准确性、敏感性和特异性的原因，目前还没有更优越的AMI标志物以取代它的位置。H-FABP与其他心肌标志物在急性心肌梗死中的价值比较很有意义。H-FABP能及早发现超急期AMI患者。对于鉴别出需急诊住院、冠状动脉造影、介入治疗的患者有很高的敏感性，尤其那些胸痛发病6h内的患者的早期诊断和预后判断有很大帮助。H-FABP如与传统的标记物cTnI、CK-MB结合起来一起检测，早期检测H-FABP，恢复期检测cTnI,有利于筛选出有心脏疾患高风险的患者，不仅方便采取积极的治疗策略，还可节约患者开支和实验室资源，H-FABP与cTnI合理互补监测也许是将来一种临床诊治缺血性心脏病的理想选择。

本方法是胶乳颗粒增强免疫比浊法：将抗体结合到胶乳颗粒上，病人血清(或标准品)中的被测抗原在缓冲液中与胶乳颗粒表面的抗体结合，使胶乳颗粒彼此交联，致使溶液浊度增加。在一定范围内，反应液浊度与被测抗原的量呈线性相关。乳胶增强免疫比浊法是测定血清中H-FABP浓度的常用方法，操作简单、灵敏度高、线性范围宽、无污染、应用范围广等显著的特点。因此，胶乳免疫比浊法有着极大的研究价值，但是目前市场上的乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒抗干扰能力差、特异性低、试剂稳定性不好或检测线性范围窄等问题，有待改进。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及其制备方法，建立一种通过抗人的心型脂肪酸结合蛋白抗体(或者单抗)与胶乳颗粒偶联、采用胶乳增强比浊法来测定人体血清中H-FABP的含量的方法，运用该方法的试剂盒具有操作简单，准确度高，重复性好，灵敏度高，且能够在全自动生化分析仪或者特种蛋白仪以及分光光度计上使用。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

第一方面，本发明提供一种心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和标准品；

所述试剂R1包括组分及含量如下：