[发明专利]一种葡萄果皮RNA的提取方法在审
| 申请号： | 201410401946.9 | 申请日： | 2014-08-14 |
| 公开（公告）号： | CN104164421A | 公开（公告）日： | 2014-11-26 |
| 发明（设计）人： | 任俊鹏;郭建;刘照亭;刘伟忠;毛妮妮;刘吉祥;鲁群 | 申请（专利权）人： | 镇江万山红遍农业园 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 龚燮英 |
| 地址： | 212400 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 葡萄 果皮 rna 提取 方法 | ||
1.一种葡萄果皮RNA的提取方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将待用的CTAB裂解液放置在65-70℃水浴中预热10min；
(2)取0.2g葡萄果皮，在研钵中用液氮研磨成粉末状后，盛入2ml离心管内；
(3)吸取1ml预热过的CTAB裂解液到2ml离心管内，加入20μlβ-巯基乙醇，缓慢震荡混匀后，放回到65-70℃水浴中，水浴45-50min，期间反复颠倒混匀2-3次；
(4)水浴完成后，将上述样品液加入等体积的氯仿/异戊醇并涡旋混合，12000rpm，4℃离心10min；
(5)吸取一定量上清液至新的2ml离心管内,重复步骤(4)抽提二次；
(6)吸取一定量上清液至一新的1.5ml离心管中，加入-20℃预冷的LiCl溶液，-20℃下沉淀过夜；
(7)4℃，12000rpm离心20-30min，弃上清，用500μl70％乙醇洗涤沉淀2次，4℃，12000rpm离心30s；
(8)用500μl100％乙醇洗涤沉淀，4℃，12000rpm离心30s；
(9)吸干残留上清，干燥15min后，用30μlDEPC水溶解RNA。
2.根据权利要求1所述的一种葡萄果皮RNA的提取方法，其特征在于所述CTAB提取液的组成成分为0.1mol/LTris-HCl，20mmol/LEDTA-Na2，1.4mol/LNaCl，质量体积比为2％的CTAB，浓度为1％的PVP(聚乙烯吡咯烷酮)。
3.根据权利要求1或2所述的一种葡萄果皮RNA的提取方法，其特征在于所用的研钵、镊子、研棒均需要40-60℃下处理3h以上，所用的1.5ml和2ml离心管均需经过DEPC水浸泡处理。
4.根据权利要求1或2所述的一种葡萄果皮RNA的提取方法，其特征在于所述的萃取液氯仿/异戊醇的体积比为24：1，萃取3次。
5.根据权利要求1所述的一种葡萄果皮RNA的提取方法，其特征在于步骤(6)中LiCl溶液的加入体积为吸取上清液体积的1/3。
6.根据权利要求2所述的一种葡萄果皮RNA的提取方法，其特征在于，所述Tris-HCl的pH值为8.0。
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