[发明专利]从胎盘中分离提取造血干细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从胎盘中分离提取造血干细胞的方法，特别是涉及一种以灌洗的方式从胎盘中分离提取造血干细胞的方法。

背景技术

造血干细胞，是指具有自我更新和多向分化能力的一类细胞。它的基本特性是具有自我更新能力，即经过一个细胞周期活动之后，可以产生两个与分裂前性质相同的造血干细胞，同时又具有多向分化能力，即在一定的环境条件下，造血干细胞具有向各系血细胞分化的能力。

造血干细胞移植目前广泛应用于恶性血液病(如急性白血病、慢性粒细胞白血病等)、非恶性难治性血液病(如再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征等)遗传性疾病(先天性免疫缺陷病﹑地中海贫血等)和某些实体瘤治疗。造血干细胞移植是指对病人进行全身照射、化疗和免疫抑制预处理后，将正常供体或自体的造血干细胞经血管输注给病人，使重建正常的造血和免疫功能。

一般来说，造血干细胞存在于三个部位，分别是骨髓、外周血和脐带血，根据其来源分别称之为骨髓造血干细胞、外周血造血干细胞和脐带血造血干细胞。随着医学和生物技术的发展，近年来发现胎盘里含有大量的造血干细胞，与上述三种来源的造血干细胞相比，胎盘中所含造血干细胞的数量很高，而且移植胎盘造血干细胞的配型要求不需要很严格，且移植后反应较轻且不需要采用药物。此外，作为胎盘造血干细胞来源-胎盘，来源广泛，孕妇生产后往往成为废弃物，其采集不会引起母亲和新生儿任何不适的感觉或产生任何不良的影响。诸多优点使胎盘造血干细胞有望取代骨髓造血干细胞、外周血造血干细胞和脐带血造血干细胞用于造血干细胞移植中。

目前在国际血液系统疾病的治疗中主要采取的造血干细胞移植的方法，根据细胞的来源，可分为三类：骨髓造血干细胞移植(BMT)、动员周围血干细胞移植(MPST)和脐带血干细胞移植(UCBT)。前两者干细胞来源丰富，一般有核细胞数可达5-10×10⁸/Kg，CD34+细胞(一种造血干/祖细胞的表面标记)可达1-5×10⁶/Kg，可是由于供者和受体之间需HLA严格相符，才能保证移植的成功，否则供者造血干细胞不易在病人体内植活，即使成活也会发生较严重的移植物抗宿主病(GVHD)。在一个家庭的子女中，仅有1/4HLA相符的机率，而在非血缘关系的无关供者中，这种机率只有百分之一，极大的限制了BMT或MPST在临床上的广泛应用。

近十余年来脐带血造血干细胞移植在临床上成功的应用促进了脐带血造血干细胞研究的发展。脐带血来自于胎盘，通常在妇女分娩后废弃，现在发现脐带血中含丰富的造血干细胞，其CD34+细胞的浓度和骨髓类似，约占总细胞数的0.1-0.5％，而更早期的造血干细胞CD34-还较骨髓浓度更高。作为一种造血细胞的来源，现在利用脐带血移植手术正在逐渐增加。与BMT相比，UCBT的优势在于减少了严重的移植物抗宿主反应，有效的扩大了对于那些缺少合适的人类白细胞抗原配型家庭或者无关供体移植的可能性。脐带血移植主要的限制在于脐血中的造血干细胞数量有限。这种限制促使临床中使用2倍剂量单位脐血移植较大的成年受助人，另一种方法是进行体外造血干细胞扩增培养，但体外扩增需要花费时间，费用也高，更重要的是扩增的同时，造血干细胞也发生分化，临床应用的结果表明脐血细胞扩增前后对移植无多大差异。

人类足月胎盘存在大量的造血干细胞，比脐带血有更多的造血干细胞，而且这些胎盘造血干细胞在冷冻储存前后都可以分离出来。胎盘造血干细胞菌落形成单位(CFU)的活性是确定的，在免疫缺陷鼠中的移植实验已经证明胎盘细胞在移植中的潜力。这些结果有力地表明，人类足月胎盘有可能成为一种新型的用于移植的造血干细胞的来源。并且胎盘中有大量的造血干细胞，胎盘血干细胞是较为早期的干细胞，能在体内分化成各种细胞，胎盘血内含有丰富的各种阶段早期造血干细胞，其含量大约是脐带血的十几倍，一个胎盘中的造血干细胞可完全满足于两个成年人的需求，若能和脐带血细胞一起应用于病人，无疑大大增加了造血干细胞的含量，使这造血干细胞可完全应用于所有的适用人群。

发明专利申请号01131190.8公开了一种通过剪碎消化的方法获得造血干细胞的方法，方法复杂，获得的造血干细胞数量少、纯度低，且细胞容易染菌。