[发明专利]一种载VEGF和万古霉素的多层缓释微球制剂、制备方法及应用

权利要求书

1.一种载VEGF和万古霉素的多层缓释微球制剂的制备方法，其步骤如下：

(1)将海藻酸钠SA的去离子水溶液与血管内皮细胞生长因子VEGF的无菌水溶液混合后，得到含有VEGF的海藻酸钠溶液；然后将该溶液逐滴滴入到交联剂溶液中，搅拌后制得VEGF均匀分布于海藻酸盐微球中的载VEGF的海藻酸盐核心球CA；其中海藻酸钠、VEGF、交联剂的用量质量比为2～8：8×10^-6：15～45，交联剂为CaCl₂、MgCl₂、BaCl₂或ZnCl₂，对应的海藻酸盐为海藻酸钙、海藻酸镁、海藻酸钡或海藻酸锌；

(2)将上述步骤制备得到的载有VEGF的海藻酸盐核心球加入到搅拌的含有万古霉素和壳聚糖CS的稀醋酸水溶液中，通过正负电荷的相吸引及交替自组装，制得海藻酸盐-壳聚糖核壳结构的复合载药单层核心微球；

(3)将步骤(2)制得的海藻酸钙-壳聚糖复合载药单层核心微球再次加入到含有VEGF的海藻酸钠溶液中，搅拌下制得海藻酸盐-壳聚糖-海藻酸钠复合微球；然后再将该复合微球加入到含有万古霉素和壳聚糖CS的稀醋酸水溶液中，搅拌下制得海藻酸盐-壳聚糖-海藻酸钠-壳聚糖复合微球CA-CS-SA-CS；

(4)将步骤(3)得到的复合微球于-20～-30℃下预冻12h～24h，后于-60～-70℃冻干直至重量不再变化，即可得载有VEGF和万古霉素的海藻酸盐-壳聚糖多层复合缓释微球。

2.如权利要求1所述的一种载VEGF和万古霉素的多层缓释微球制剂的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，海藻酸钠SA的去离子水溶液是将0.2～0.8g海藻酸钠溶于20mL去离子水中得到的溶液；VEGF的无菌水溶液是将0.8ug的VEGF的投入到0.4mL的无菌水中得到的溶液；交联剂溶液是将1.5～4.5g的CaCl₂、MgCl₂、BaCl₂或ZnCl₂溶于30mL水所配置的溶液；搅拌速度为200～300r/min，搅拌时间为20～40min。

3.如权利要求1所述的一种载VEGF和万古霉素的多层缓释微球制剂的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，是将100～200mg的万古霉素投入到含有0.3～0.9g壳聚糖的30mL稀醋酸水溶液中，稀醋酸水溶液中稀醋酸的体积分数为1％～3％；搅拌速度为500～800r/min，搅拌时间为10～20min。

4.如权利要求1所述的一种载VEGF和万古霉素的多层缓释微球制剂的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，含有VEGF的海藻酸钠溶液是将0～0.8ug的VEGF投入到含有0.15～0.6g海藻酸钠SA的30mL去离子水中；含有万古霉素和壳聚糖CS的稀醋酸水溶液是将200～400mg的万古霉素投入到含有0.3～0.9g壳聚糖的30mL稀醋酸水溶液中，稀醋酸水溶液中稀醋酸的体积分数为1％～3％；搅拌速度为500～800r/min，搅拌时间为10～20min。

5.如权利要求1所述的一种载VEGF和万古霉素的多层缓释微球制剂的制备方法，其特征在于：上述步骤(3)中，所得载有VEGF和万古霉素的海藻酸盐-壳聚糖多层复合缓释微球的平均粒径为500～600um。

6.一种载VEGF和万古霉素的多层缓释微球制剂，其特征在于：其为多层核壳结构，核心球为载有VEGF的海藻酸盐，第一层壳为载有万古霉素的壳聚糖，第二层壳为载有VEGF的海藻酸钠，第二层壳为载有万古霉素的壳聚糖；且由权利要求1～5任何一项所述的方法制备得到。

7.权利要求6所述的一种载VEGF和万古霉素的多层缓释微球制剂在制备治疗骨缺损、骨组织再生或创伤愈合的药物中的应用。