[发明专利]在宽温度范围内具有活性的蛋白酶变体

说明书

本申请为2007年7月9日提交的、发明名称为“在宽温度范围内具有活性的蛋白酶变体”的PCT申请PCT/US2007/015642的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日期为2009年1月16日，申请号为200780026962.2。

本申请要求在审美国临时专利申请序列号60/831,732的优先权。

发明领域

本发明提供特别适用于餐具洗涤应用的蛋白酶组合物。

背景技术

通常地，传统家庭和工业餐具洗涤组合物依赖于高碱度洗涤剂洗涤和氯漂白的结合用以清洁和消毒餐具。这类系统通常对可漂白污点作用良好。但是，它们在去除含蛋白的污垢时作用不足，含蛋白的污垢经常出现在家庭、医院、自助餐厅、公共饮食业等的餐具中。另外，很高碱性并包含氯的组合物被认为对消费者和环境都不友好。

已进行各种尝试以产生有效去除蛋白质类污垢的餐具洗涤组合物。这些组合物通常包括在碱性条件下(例如，pH至少9.5)具有活性的蛋白酶。但是，这样的组合物具有明显的缺点，因为它们很难配制成液体或凝胶形式，这是消费者通常优选的餐具洗涤用洗涤剂形式。另外，碱性餐具洗涤组合物经常被认为是刺激物。

已进行一些尝试以产生低pH值(例如，pH小于9.5)餐具洗涤组合物。这些组合物更安全，对环境更加友好，并且能够配制成凝胶和液体形式。但是，已经证明：现有的低pH的餐具洗涤组合物对去除蛋白质类污垢非常低效，即使是在餐具洗涤组合物里配制高浓度的酶(例如，蛋白酶)时也是如此。

因此，在本领域对从餐具上高效去除蛋白质类污垢的餐具洗涤组合物仍存在需要。另外，对于对环境和消费者更加友好并且处于易于使用和成本有效的形式的餐具洗涤组合物仍存在需要。

发明内容

本发明提供突变型蛋白酶，其在餐具洗涤剂应用中显示出改进的性质。在某些优选的实施方式中，所述突变型蛋白酶具有与PB92丝氨酸蛋白酶的氨基酸序列至少70％的同源性，PB92丝氨酸蛋白酶具有如下氨基酸序列：H₂N-AQSVPWGISRVQAPAAHNRGLTGSGVKVAVLDTGISTHPDLNIRGGASFVPGEPSTQDGNGHGTHVAGTIAALNNSIGVLGVAPNAELYAVKVLGASGSGSVSSIAQGLEWAGNNGMHVANLSLGSPSPSATLEQAVNSATSRGVLVVAASGNSGAGSISYPARYANAMAVGATDQNNNRASFSQYGAGLDIVAPGVNVQSTYPGSTYASLNGTSMATPHVAGAAALVKQKNPSWSNVQIRNHLKNTATSLGSTNLYGSGLVNAEAATR-COOH(SEQ ID NO：2)。在另外进一步实施方式中，所述突变型蛋白酶具有与SEQ ID NO:2至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％的同源性。在此处每个优选的实施方式中，与野生型PB92蛋白酶相比，所述突变型蛋白酶提供了改进的洗涤性能和/或改进的稳定性。

在某些优选的实施方式中，与起始蛋白酶相比，本发明提供具有改进的餐具洗涤性能的变体蛋白酶。在某些特别优选的实施方式中，所述酶包括那些称为049、045、046、047/048、050、051/052、053、054、055/056、057、058、059和060的酶，其具有如在本文表1中所列举的取代。在另外的实施方式中，本发明提供的这些酶具有另外的突变(例如，取代、插入和/或缺失)。

在某些特别优选的实施方式中，本发明提供的酶被称为049，其具有如下的氨基酸序列：

AQSVPWGISRVQAPAAHNRGLTGSGVKVAVLDTGISTHPDLNIRGGASFVPGEPSTQDGNGHGTHVAGTIAALNNSIGVLGVAPNAELYAVKVLGASGSG SVSSIAQGLE WAGNNVMHVANLSLGLQAPSATLEQAVNSATSRGVLVVAASGNSGAGSISYPARYANAMAVGATDQNNNRASFSQYGAGLDIVAPGVNVQSTYPGSTYASLNGTSMATPHVAGAAALVKQKNPSWSNVQI RNHLKNTATS LGSTNLYGSG LVNAEAATR(SEQ ID NO：3)

本发明还提供新型的酶餐具洗涤用洗涤剂，包括蛋白水解酶产物，其包含至少一种于此提供的突变型蛋白酶。