[发明专利]一种检测禽流感病毒及其H3、N2亚型的引物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测禽流感病毒及其H3、N2亚型的引物及其应用，属于生物技 术领域。

背景技术

禽流感(Avianinfluenza,AI)是危害禽类养殖的一类重要传染病，其病原体 AIV为单股负链的RNA病毒，分8个节段，分别编码HA、NA、NP、NS、MP、PA、PB1 和PB2蛋白。在AIV8个基因片段中，M基因是最保守的基因片段，所有亚型AIV的 PCR检测均选择M基因作为靶基因。HA、NA是变异最大的两个基因节段，两者之间存 在的某种平衡对病毒的致病性有很大关系。根据HA、NA基因抗原性差异，AIV可进一 步分为不同的亚型，目前已鉴别出18种HA(H1-H18)亚型和11种NA(N1-N11)亚型。 H3亚型AIV属于低致病性AIV，其在低致病性AIV中占有较重要地位。研究表明，H3 亚型AIV在家禽中分离率较高，且在不同家禽中分布的季节性与我国人群中流感病毒 流行的季节性比较一致，这就为两种宿主的流感病毒在猪这个“混合器”中发生基因 重排提供了条件。1968年暴发的香港流感病毒A/HongKong/68(H3N2)经研究推测就是 由H3亚型AIV与H2N2亚型人流感病毒在宿主猪体内发生基因重排而产生的。此外， N2亚型AIV是感染家禽(H9N2)并能致病的常见NA亚型，其可与大多数HA亚型AIV 组合形成不同血清型的AIV。因此，建立一种简便、快速检测AIV且能同时鉴别H3N2 亚型AIV的方法对我国养禽业和公共卫生都有重要意义。

长期以来，针对AIV的检测主要依靠传统的病原分离鉴定与血清学试验，这些方 法耗时较长，给诊断带来了一定的局限性。随着分子生物学和生物试剂的不断发展， PCR检测方法已成为病毒检测的重要部分。而多重RT-PCR以其同一反应中可同时扩增 出多个核苷酸片段的优势已应用于多项病毒和基因的同时检测。而目前专门针对H3N2 亚型AIV的PCR检测方法未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测禽流感病毒及其H3、N2亚型的引物及其应用。

本发明提供一组引物，由如下(1)-(6)所示的DNA分子组成：

(1)SEQIDNo.1所示的DNA分子；

(2)SEQIDNo.2所示的DNA分子；

(3)SEQIDNo.3所示的DNA分子；

(4)SEQIDNo.4所示的DNA分子；

(5)SEQIDNo.5所示的DNA分子；

(6)SEQIDNo.6所示的DNA分子。

一种鉴定或辅助鉴定待测样品中禽流感病毒及待测样品中H3亚型和/或N2亚型 禽流感病毒的试剂盒也属于本发明的保护范围，该试剂盒包含上述引物。

一种鉴定或辅助鉴定待测样品中禽流感病毒及待测样品中H3亚型和/或N2亚型 禽流感病毒的方法也属于本发明的保护范围，包括如下步骤：以待测样品的cDNA为模 板，以上述引物为引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；如果PCR扩增产物含有大 小为518bp的条带，则待测样品候选为含有禽流感病毒的样品；如果PCR扩增产物同 时含有大小分别为518bp和271bp的条带，则待测样品候选为含有H3亚型禽流感病 毒的样品；如果PCR扩增产物同时含有大小分别为518bp和418bp的条带，则待测 样品候选为含有N2亚型禽流感病毒的样品；如果PCR扩增产物同时含有大小分别为 518bp、418bp和271bp的条带，则待测样品候选为含有H3N2亚型禽流感病毒的样 品；

所述大小为518bp的条带是以SEQIDNo.5和SEQIDNo.6所示的DNA分子为 引物进行PCR扩增得到的；

所述大小为418bp的条带是以SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示的DNA分子为 引物进行PCR扩增得到的；

所述大小为271bp的条带是以SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示的DNA分子为引 物进行PCR扩增得到的。