[发明专利]HPLC同时测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量的方法

权利要求书

1.一种采用HPLC法检测车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量的方法，其特征是：按照如下步骤对诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸同时进行定性和定量分析：

(1) 混合标准品溶液制备

称取车叶草苷酸对照品5 mg，去乙酰车叶草苷酸对照品25 mg，置于10 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品储备液；

(2) 样品制备

取20 mL诺尼果汁10000 r/m离心5 min，吸取上清液 10 mL于100 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；

(3) 高效液相色谱分离检测条件

采用C18反相色谱柱，以流动相A 磷酸水溶液；流动相B乙腈，采用梯度洗脱，采用紫外检测器检测，柱温为30 - 40℃，流速为0.2-1.2 mL / min；

(4) 样品定性和定量分析

采用系列混合标准品溶液按照步骤(1)进行配制，按步骤(3)色谱条件进样；以峰面积y对质量浓度 x进行线性回归，得到车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸标准品的回归方程；每个样品按步骤(2)进行前处理后，按步骤(3)色谱条件分别进样分析，样品峰与标准品保留时间比对定性，样品峰面积代入相对应的标准曲线回归方程定量。

2.根据权利要求书1所述的方法其特征在于：所述步骤(3)色谱条件流动相由磷酸水溶液（流动相A）-乙腈（流动相B）组成，其中流动相A浓度范围为0.05-0.2 %，色谱温度为30 – 40℃，流速为0.2-1.2 mL / min，梯度洗脱程序如下表所示：

时间（min）磷酸溶液（A）（%）乙腈（B）（%）0-1096 410-2285 15 22-4096 4

。

3.根据权利要求书2所述的方法其特征在于：流动相A为磷酸水溶液最佳浓度为0.1 %，最佳检测波长为237 nm，最佳柱温为35 ℃，最佳流速为0.5 mL / min。

4.根据权利要求1所述的方法其特征在于，所说的制备标准品溶液和样品溶液用0.22 μm微孔滤膜过滤，进样量为5 μl，记录时间为40 min。

5.根据权利要求1-4所述的方法，其特征在于，所说的诺尼果汁为纯诺尼果汁或含诺尼成分的其它产品。