[发明专利]HPLC同时测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种HPLC同时测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量的检测方法。

背景技术

诺尼(Noni)，学名海巴戟天（Morinda citrifolia Linn.），2010年5月，中国卫生部将诺尼果浆正式批准为新资源食品。诺尼果汁有广泛的营养和药用价值，具有抗肿瘤、抗氧化、增强免疫力、降血脂和保护心血管等功能，对多种疾病有预防和治疗作用。

车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸是环烯醚萜类物质，是诺尼果汁中重要的活性成分，具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗畸变等活性，与人体健康密切相关，逐渐成为研究热点。但目前尚无利用HPLC测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸的方法，限制了诺尼果汁功效性成分的研究。因此，亟需建立一种同时检测诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸的高效液相色谱法。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种使用HPLC同时测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量的方法，为诺尼果汁的功效研究奠定了基础。实现本发明的具体技术方案是：用HPLC同时测定诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量，其特征是：

本发明中混合标准品溶液的制备方法为：

称取车叶草苷酸对照品5 mg，去乙酰车叶草苷酸对照品25 mg，置于10 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品储备液，测定前经0.22 μm微孔滤膜过滤。

本发明中样品溶液的制备方法为：

取20 mL诺尼果汁10000 r/m离心5 min，吸取上清液 10 mL于100 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，测定前经0.22 μm微孔滤膜过滤。

本发明的色谱条件为：

色谱柱为Shim-pack VP-ODS-C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；VWD-3000紫外检测器；柱温为35 ℃；流动相A为0.1 %磷酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱条件为0-10 min，4 % B；10-22，15 % B；22-40 min，4 % B；流速为0.5 mL / min；检测波长为237 nm；在上述色谱条件下，取对照品溶液和标准品溶液分别进样，记录色谱图。

    本发明中所说的诺尼果汁为纯诺尼果汁或含诺尼成分的其它产品。

本发明采用HPLC法，梯度洗脱，同时测得诺尼果汁中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸含量。结果：车叶草苷酸在浓度为5-50 μg/mL范围内具有良好线性关系，平均回收率为99.02 %，RSD 为1.58 %；去乙酰车叶草苷酸在浓度为25-250 μg/mL范围内具有良好线性关系，平均回收率为102.15 %，RSD 为2.40 %。本发明方法简便、可靠、迅速，灵敏度高，重现性好，为诺尼果汁的功效研究提供科学依据。

四、附图说明

图1为本发明中车叶草苷酸和去乙酰车叶草苷酸混合标准品的色谱图。

图2为本发明中诺尼果汁样品溶液的色谱图。

五、具体实施方式

下面结合具体实例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。

实施例1：

1、仪器与材料

1.1仪器

Thermo UltiMate 3000型高效液相色谱仪（VWD-3000紫外检测器，Chromeleon 7色谱工作站，Thermo Fisher公司），Shim-pack VP-ODS-C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；minispin离心机（eppendorf 公司）。

1.2 材料

对照品车叶草苷酸购自成都普菲德生物技术有限公司，去乙酰车叶草苷酸购自北京盛世康普化工技术研究院，乙腈、磷酸均为色谱纯。西沙诺尼果汁由海南诺尼生物工程开发有限公司生产，产品批次为20120911、20130618、20131206和20140122。

方法与结果

2.1色谱条件的选择

检测器：Thermo VWD-3000；检测波长：237nm；色谱柱：Shim-pack VP-ODS (250×4.6 mm，5 μm)；柱温：35 ℃；流动相A为0.1 %磷酸溶液，流动相B为乙腈，进行梯度洗脱，梯度洗脱程序如表1所示，流速：0.5 mL / min，检测波长为237 nm，柱温最优为35℃。