[发明专利]一种鲎素肽-抗体融合蛋白及制备方法

权利要求书

1.一种鲎素肽-抗体融合蛋白，其特征在于：编码所述融合蛋白的基因序列包括至少一个鲎素肽单元，编码鲎素肽单元的基因T直接连接或通过编码接头单元的连接肽基因LU连接于编码抗体单元的基因M的重链或轻链的3’端或5’端，鲎素肽-抗体偶联表达方式为：(T-LU)_N–M，其中，N是≥1的整数， 

其中，所述鲎素肽单元为：tachyplesin I、tachyplesin II、tachyplesin III、polyphemusin I和polyphemusin II五种鲎素肽中的至少一种， 

其中，所述接头单元是基因工程技术所能利用的连接肽，是根据具体采用的抗体单元及鲎素肽单元的重叠次数而设计，LU为核酸，编码连接肽， 

其中，所述抗体单元是单克隆抗体，包含鼠或人或人源化的重链可变区和/或轻链可变区的氨基酸序列。 

2.根据权利要求1所述的鲎素肽-抗体融合蛋白，其特征在于：所述鲎素肽单元为以五种鲎素肽氨基酸序列为基础进行的增加、删减、重复、联合，替代和修饰而得到的对癌细胞或致病菌具有生长抑制或毒性活性的多肽，所述编码鲎素肽单元的基因T编码上述任意一种鲎素肽。 

3.根据权利要求1所述的鲎素肽-抗体融合蛋白，其特征在于：所述鲎素肽单元具体包括tachyplesin I，以T1表示和tachyplesin II，以T2表示，上述T为编码T1和T2的核酸。 

4.根据权利要求1所述的鲎素肽-抗体融合蛋白，其特征在于：所述鲎素肽接头单元具体为G₄S，其氨基酸序列为SQ7，LU为编码G₄S的核酸，其核酸序列为SQ15。 

5.根据权利要求1所述的鲎素肽-抗体融合蛋白，其特征在于：所述单克隆抗体是完整的抗体，或抗体片段。 

6.根据权利要求5所述的鲎素肽-抗体融合蛋白，其特征在于：所述抗体片段为Fab、Fab’、F(ab’)₂、Fv片段、双特异抗体(diabody)、线型抗体、scFv、或scFv-Fc片段中的至少一种，核酸M编码单克隆抗体或抗体片段。 

7.根据权利要求6所述的鲎素肽-抗体融合蛋白，其特征在于：所述单克隆抗体具体为能够特异性结合B淋巴瘤细胞表面抗原CD19的单克隆抗体的Fab片段，简写为anti-CD19Fab，其氨基酸序列为SQ6，M具体为编码anti-CD19Fab的核酸，其核酸序列为SQ14。 

8.根据权利要求7所述的鲎素肽-抗体融合蛋白，其特征在于：所述anti-CD19Fab进一步的包括轻链和重链，轻链即L链，重链即H链，L链包括轻链可变区VL和轻链恒定区VL，H链包括重链可变区VH和重链恒定区CH1，L链和H链氨基酸序列分别为SQ18和SQ19；L链和H链的核酸序列分别为SQ20和SQ21。 

9.根据权利要求1－8所述的鲎素肽-抗体融合蛋白，其特征在于：该融合蛋白是将T1的基因通过G₄S基因与anti-CD19Fab L链3’端相连，并且连接上终止密码子TAA，形成新 的序列L-T1，其核酸序列为SQ16，将T2的基因通过G₄S基因与anti-CD19Fab H链3’端相连，并且连接上终止密码子TAA，形成新的序列H-T2，其核酸序列为SQ22。 

10.根据权利要求9所述的鲎素肽-抗体融合蛋白，其特征在于：将L-T1和H-T2序列相连接，由此完成表达式(T-LU)_N–M的一种新序列L-T1-H-T2，以此序列表达形成鲎素肽-抗体融合蛋白anti-CD19Fab-T1+T2，其完整氨基酸序列为SQ8，完整核酸基因序列为SQ17。