[发明专利]一种鲎素肽-抗体融合蛋白及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤学、病原微生物学和生物药学领域，本发明涉及一种鲎素肽-抗体融合蛋白及制备方法，具体而言，本发明提供了可以产生靶向肿瘤或致病菌杀伤作用的含有鲎素肽的融合蛋白、及其制备方法，进而为肿瘤和病原微生物感染的靶向治疗提供了优良的候选药物。

背景技术

鲎素肽来源于鲎血细胞提取物，是含有17-18个氨基酸残基的多肽，其氨基端和羧基端都是碱性氨基酸，羧基端还具有一个独特的精氨酸-酰胺结构。四个Cys形成2个二硫键维持鲎素肽折叠成发夹结构。目前发现了5种鲎素肽，tachyplesin I和tachyplesin II发现于东方鲎血细胞中，tachyplesin III发现于圆尾鲎血细胞中，polyphemusin I和polyphemusin II发现于美洲鲎血细胞中，其各自氨基酸序列如下：

tachyplesin I       K-W-C-F-R-V-C-Y-R-G-I-C-Y-R-R-C-R-NH₂

tachyplesin II      R-W-C-F-R-V-C-Y-R-G-I-C-Y-R-K-C-R-NH₂

tachyplesin III     K-W-C-F-R-V-C-Y-R-G-I-C-Y-R-K-C-R-NH₂

polyphemusin I      R-R-W-C-F-R-V-C-Y-R-G-I-C-Y-R-R-C-R-NH₂

polyphemusin II     R-R-W-C-F-R-V-C-Y-K-G-F-C-Y-R-K-C-R-NH₂

化学性质稳定，耐高温。各种研究资料显示鲎素肽具有强烈抗菌作用，具体特点如下：

抗菌活性：(1)杀菌活力高，致死浓度均在μmol/L级，(2)作用迅速，往往在几秒或几分钟内可将99％以上的病原杀灭，(3)对真核生物细胞无毒性，(4)活性稳定，比较耐热，100℃处理30min不丧失其抗菌活性，(5)在高盐环境下同样具有抗菌活性，这是海洋抗菌肽的一个重要特征。鲎素的抗微生物作用远远超过目前抗生素药物的作用范畴，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌及囊膜病毒均能产生有效的杀伤作用，且没有耐药性问题，因此应用前景十分诱人。

抗癌活性：不仅如此，同时还发现鲎素肽具有很强的抗肿瘤作用，国内外均有文献报道对白血病细胞，淋巴瘤细胞，乳腺癌细胞，肺癌细胞，肝癌细胞，胃癌细胞，黑色素瘤细胞，人宫颈癌细胞等等都具有很好的抑制作用，毒副作用低。鲎素肽不仅是抑制肿瘤细胞活性强，同时具备抑制多种肿瘤细胞的活性，毒副作用低，不易产生耐药性。

鲎素肽缺点，虽然鲎素肽的优势明显，但对其在生物药物的研究并不多，甚至一度出现了停滞的现象，目前文献中提出的对于鲎素肽的利用主要在农作物和畜禽养殖业上的应用。导致这一问题的主要原因是鲎素肽本身分子量太低，仅有2.3kD左右，虽然具有很好的抗菌和抗癌作用，但作为药物应用于体内时，由于分子量太低，体内代谢快，还未产生对肿瘤和致病菌的杀伤作用已经排除体外，也正是因为这个缺点，鲎素肽在药物方向的应用受到限制。虽然一些文献提出了鲎素肽在抗癌药物方向的应用，但没有根本的解决这一问题。