[发明专利]含离子液体共溶剂介质中制备(R)‑3,5‑双三氟甲基苯乙醇的方法

权利要求书

1.一种在含离子液体共溶剂体系中制备(R)-3,5-双三氟甲基苯乙醇的方法，其特征在于所述方法为：以3,5-双三氟甲基苯乙酮为底物，以重组基因工程菌经发酵培养获得的湿菌体为催化剂，以四甲基铵半胱氨酸离子液体、异丙醇和pH 6.0～8.0磷酸盐缓冲液为反应介质构成反应体系，于20～45℃、200rpm条件下进行生物催化不对称还原反应，反应完全后，反应液经分离纯化得到(R)-3,5-双三氟甲基苯乙醇；所述重组基因工程菌是由来源于雷弗松氏菌(Leifsonia xyli)HS0904的短链脱氢酶突变体基因构建的重组表达载体转化宿主菌获得的，所述短链脱氢酶突变体基因的核苷酸序列为SEQ IDNO.3所示；所述底物的初始浓度为200mM～1500mM，所述湿菌体的用量以反应体系总体积计为20～200g/L，所述离子液体的质量用量以反应体系总体积计为10～50g/L，所述异丙醇的体积终浓度为10～50％。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述底物的浓度为1200mM。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述分离纯化的方法为：反应结束后，将反应液用等体积的乙酸乙酯萃取，离心收集乙酸乙酯层，将乙酸乙酯层减压浓缩至无液体流出，获得浓缩液，将浓缩液进行硅胶柱层析，以体积比8:1的石油醚和乙酸乙酯混合液为洗脱剂进行洗脱，TLC法跟踪，收集R_f值为0.3～0.6的洗脱液，减压浓缩至干，即得产物。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于底物的浓度为1200mM，所述湿菌体的用量以反应体系总体积计为50g/L，所述离子液体的质量用量以反应体系总体积计为35g/L。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述催化剂按如下方法制备：将含短链脱氢酶突变体基因的重组工程菌接种至含50μg/mL卡那霉素的LB培养基中培养，20～37℃、100～200rpm振荡培养6～12h，将培养液以体积比1:100接种至新鲜的含50μg/mL卡那霉素的LB培养基中，37℃、200rpm振荡培养至培养液的OD₆₀₀达到0.6～0.9时，向培养液中加入终浓度为0.1～1.5mmol/L的IPTG，20～37℃、200rpm继续诱导培养6～12h，将所得培养液离心，收集湿菌体。