[发明专利]四苯乙烯衍生物在检测甲基转移酶活性和甲基转移酶抑制剂浓度上的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种四苯乙烯衍生物在检测甲基转移酶活性和甲基转移酶抑制剂浓度上的应用。

背景技术

带有电荷的荧光共轭聚合物，能与带相反电荷的荧光淬灭分子发生相互作用。促成淬灭的激发态能通过电荷(或能量)转移在共轭聚合物的大量重复单元中连续传递，从而少量的淬灭分子就可以使聚合物的荧光发生高效淬灭。研究者们基于这个原理，发展出了许多相关的生物分析，生物传感新方法。例如，将荧光共轭聚合物和淬灭分子共价修饰到具有发卡(hairpin)结构的核酸分子两端，可以得到具有超淬灭性质的分子信标(molecularbeacon)。荧光共轭聚合物的荧光被淬灭分子高效淬灭，当加入与之互补的核酸链时，发卡结构被打开，聚合物的荧光恢复。基于此实现对核酸分子的灵敏检测(Angew.Chem.Int.Ed.2005,44,2572–2576)。又如，带有负电荷的荧光共轭聚合物因为静电吸引和带正电荷的淬灭分子相互接近，从而荧光淬灭。而淬灭分子修饰了乙酰胆碱酯(ACh)的衍生物，可以被乙酰胆碱酯酶(AChE)水解而生成带负电荷的分子。这样一来，淬灭分子因静电排斥而远离荧光共轭聚合物，荧光恢复。基于此实现对乙酰胆碱酯酶活性的灵敏检测(Angew.Chem.Int.Ed.2007,46,7882–7886)。

现有报道的超淬灭方法都是针对荧光共轭聚合物的，而荧光共轭聚合物的合成繁琐，费时，成本高，其较差的水溶性和生物相容性也限制了在生物分析，生物传感中的进一步应用。

与荧光共轭聚合物将重复的荧光单体共价连接不同，荧光小分子可以通过次极力(如静电作用等)形成非共价的聚集体，该聚集体的荧光同样可以被淬灭分子高效淬灭。由于荧光小分子合成容易，水溶性及生物相容性好，在生物分析和生物传感发面具有更好的应用前景。四苯乙烯(TPE)是一种十分经典的具有AIE性质的有机小分子，它的AIE性质在此前的文献里已有大量报道。唐本忠等人报道过带有正电荷的四苯乙烯衍生物及其制备方法(Chem.Eur.J.2008,14,6428–6437；Chem.Eur.J.2010,16,1232–1245)，现有技术中还没有将带有正电荷的四苯乙烯衍生物用于检测甲基转移酶活性和甲基转移酶抑制剂方面的报道。

发明内容

本发明的目的是提供四苯乙烯衍生物在检测甲基转移酶活性和甲基转移酶抑制剂浓度上的应用，该四苯乙烯衍生物具有较高的水溶性和生物相容性，且检测灵敏度高。

本发明首先提供四苯乙烯衍生物在检测甲基转移酶活性上的应用。

优选的是，所述的四苯乙烯衍生物检测甲基转移酶活性的方法，包括：

步骤一：制备淬灭分子修饰的双链核酸；

步骤二：将步骤一得到的淬灭分子修饰的双链核酸与S-腺苷甲硫氨酸、限制性内切酶、不同浓度的甲基转移酶和酶反应的缓冲溶液反应，得到混合溶液；

步骤三：将步骤二得到的混合溶液与四苯乙烯衍生物水溶液反应，对甲基转移酶的活性进行检测。

优选的是，所述的甲基转移酶为Dam、HpaII MTase或M.SssI。

优选的是，所述的甲基转移酶的浓度范围为0-160U/mL。

优选的是，所述的步骤二的反应是先在37℃反应5h，然后再升温至90℃反应10min。

优选的是，所述的四苯乙烯衍生物的结构式为：

本发明还提供四苯乙烯衍生物在检测甲基转移酶抑制剂浓度上的应用。

优选的是，所述的四苯乙烯衍生物检测甲基转移酶抑制剂的方法，包括：

步骤一：制备淬灭分子修饰的双链核酸；

步骤二：将步骤一得到的淬灭分子修饰的双链核酸与S-腺苷甲硫氨酸、限制性内切酶、甲基转移酶、不同浓度的甲基转移酶抑制剂和酶反应的缓冲溶液反应，得到混合溶液；

步骤三：将步骤二得到的混合溶液与四苯乙烯衍生物水溶液反应，对甲基转移酶抑制剂的浓度进行检测。

优选的是，所述的甲基转移酶抑制剂为庆大霉素、5-氟尿嘧啶、卞青霉素或丝裂霉素。

优选的是，所述的四苯乙烯衍生物的结构式为：

本发明的原理