[发明专利]一种多环芳烃酶联免疫检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种检测多环芳烃的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括如下组分：

(1)包被有多环芳烃抗原的酶标板(96孔)；

(2)多环芳烃特异性抗体；

(3)酶标二抗；

(4)多环芳烃标准品溶液；

(5)10×稀释缓冲液；

(6)显色液；

(7)50×浓缩洗液；

(8)终止液。

2.根据权利要求1所述的多环芳烃酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述多环芳烃抗原由多环芳烃半抗 原和载体蛋白通过活性脂法偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清白蛋白。

3.根据权利要求1所述的多环芳烃酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述10×稀释缓冲液为含有30％甲 醇、1％牛血清白蛋白和0.01％吐温20，pH7.4的磷酸盐缓冲液，其中磷酸盐缓冲液主要成分含量为KH₂PO₄0.2％，Na₂HPO₄3％，NaCl8％，KCl0.2％。

4.根据权利要求1所述的多环芳烃酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述多环芳烃特异性抗体为权利要 求2中所述多环芳烃抗原按常规免疫方法制备得到的单克隆抗体或多克隆抗体。其工作液为特异性抗体与 上述1×稀释缓冲液按照1∶400～1000的比例混合。

5.根据权利要求1所述的多环芳烃酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述酶标二抗为羊抗鼠或羊抗兔抗 体，所用工作液为酶标抗体与上述稀释缓冲液按照1∶1000～2000的比例混合。

6.根据权利要求1所述的多环芳烃酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述多环芳烃标准品溶液浓度为 10μg/ml，使用时用1×稀释缓冲液稀释成浓度为0.4μg/ml、0.1μg/ml、0.04μg/ml、0.01μg/ml、0.004 μg/ml的一系列标准品溶液。

7.根据权利要求1所述的多环芳烃酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述浓缩洗液为含有0.5％～2.5％(v/v) 吐温20的Tris-Cl缓冲液，pH7.2，浓度为0.1mol/L，为正常使用浓度的50倍。

8.根据权利要求1所述的多环芳烃酶联免疫检测试剂盒，其特征在于所述终止液为1～2mol/L硫酸溶液。

9.权利要求1～8任一所述多环芳烃酶联免疫试剂盒在检测多环芳烃类污染物残留时的使用方法，其特征 在于包括如下步骤：

(1)将试剂盒从冷藏环境中取出，平衡至室温；

(2)将标准品或经过前处理的待测样品加入已经包被有多环芳烃抗原的酶标板孔内，再加入抗体工作液， 轻拍混匀，室温孵育；

(3)用洗涤液进行洗涤；

(4)加入用1×稀释缓冲液稀释后的酶标二抗，轻拍混匀，室温孵育；

(5)用洗涤液进行洗涤；

(6)在每孔中加入显色液，轻拍混匀，室温避光孵育；

(7)在每孔中加入终止液，混合均匀，在450nm波长下酶标仪读取吸光值；

(8)检测结果分析，根据标准品浓度和相对吸光值绘制标准曲线，计算加样孔中样品浓度，确定实际样 品中多环芳烃含量。

10.根据权利要求9所述多环芳烃酶联免疫检测试剂盒的使用方法，其特征在于，(2)所述的前处理是指 海水样品需要经过前处理过程才可用于检测。