[发明专利]一种多环芳烃酶联免疫检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及酶联免疫检测技术，具体涉及一种用于检测环境水样中多环芳烃类有机污染物的酶联免 疫试剂盒，其特别适用于生活饮用水，地下水，江河湖水，海水，工业废水等水样中多环芳烃类有机污染 物残留的检测。

技术背景

多环芳烃(PAHs)是一大类广泛存在于环境中的有机污染物，由两个或多个芳香环构成，许多种 类的PAHs及其代谢物对人体具有较强的致癌性，因此，PAHs成为世界各国所面临的重大环境与公共健康 问题之一。美国国家环保局(USEPA)将蒽、芘、荧蒽、苯并[a]芘等16种PAHs列为优先控制污染物，对其 进行严格的监管和控制。我国地表水环境质量标准(GB3838-2002)中严格规定了地表水中苯并[a]芘的浓度 限量。

环境样品中PAHs的监测和分析主要包括以下几个步骤：样品采集，PAHs提取，净化和浓缩，最后 采用气相色谱法或高效液相色谱法等仪器分析方法进行检测。整个过程步骤繁琐，耗时较长，仪器设备昂 贵，不适合对大量样品在短时间的分析和监测。除以上两种主要的仪器分析方法外，用于测定PAHs的方 法还有荧光法和酶联免疫吸附分析法。与其它方法相比，酶联免疫吸附分析法应用于环境污染物的检测分 析在国外早有先例，并得到了外国环境保护部门的认可。酶联免疫吸附分析法(Enzyme-Linked ImmunoSorbentAssay，ELISA)是将抗原-抗体的免疫反应和酶的高效催化反应有机结合形成的一种综合性 技术。同时具有特异性好，灵敏度高，操作简便快捷，且可同时处理大批量样品等忧点。因此，研究应用 该方法对PAHs进行检测分析越来越受到研究人员的关注。

发明内容

本发明的目的在于克服现有检测多环芳烃的方法对设备的依赖性高，并且不能实现对大批量样品的 快速检测的缺点，提供一种检测水样中多环芳烃的酶联免疫检测试剂盒及其检测方法，本发明不受检测设 备的限制并且能够实现对大批量的多环芳烃样品进行快速筛查。

本发明的另一目的在于提供一种检测样品中多环芳烃的快速、简便的定性或定量的方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下测定原理：首先将多环芳烃抗原吸附于酶标板孔内，然后加入 待测样品和人工制备的多环芳烃抗体，酶标板孔内的抗原与样品中的待测物相互竞争与加入的多环芳烃抗 体结合，通过洗涤后，酶标板孔内留下抗原与抗体的结合物，再加入酶标记的针对第一抗体的第二抗体(酶 标二抗，若一抗为兔抗体，则酶标二抗为酶标羊抗兔IgG抗体；若一抗为鼠抗体，则酶标二抗为酶标羊抗 鼠IgG抗体)，酶标二抗会与一抗结合，在载体上形成抗原-多环芳烃抗体一酶标二抗的结合物。洗去未 结合的酶标二抗，再加入底物，酶催化底物反应而显色。酶标板上固定的抗原及加入的一抗、酶标二抗的 量是一定的，若样品中待测物浓度较高，则与之结合所需的一抗量就较多，与载体上抗原结合的抗体量就 相对较少，发色反应减弱，吸光度值降低；反之，则发色反应增强，吸光度值增高。因而，根据已知浓度 的多环芳烃的标准曲线和待测样品的吸光度，再根据吸光度与多环芳烃浓度之间的半对数关系作图即得标 准曲线，并推算出待测样品中多环芳烃的浓度。

本发明上述目的可通过以下技术方案实现：

本发明提供的酶联免疫试剂盒包括以下组分：

(1)包被有多环芳烃抗原的酶标板(96孔)；

(2)多环芳烃特异性抗体

(3)酶标二抗；

(4)多环芳烃标准品溶液；

(5)显色液；

(6)终止液；

(7)10×稀释缓冲液；

(8)浓缩洗液；

所述多环芳烃抗原由多环芳烃半抗原和载体蛋白通过活性脂法偶联得到，所述载体蛋白为牛血清 白蛋白，卵清白蛋白；所用的包被液为pH9.6，0.05M的碳酸盐缓冲液，多环芳烃抗原的包被浓度为0.1～ 1μg/ml，封闭液优选为含有1％BSA和1％蔗糖的磷酸盐缓冲液(PBS溶液)。所述PBS溶液浓度为0.01mol/L， pH值7.4，其中主要成分含量为KH₂PO₄0.2％，Na₂HPO₄3％，NaCl8％，KCl0.2％。

所述酶标板为96孔聚苯乙烯酶标板，包被有能与抗多环芳烃抗体特异性结合的多环芳烃抗原，并 封闭微孔板表面未吸附多环芳烃抗原的位点。