[发明专利]一种核酸检测方法和试纸条

权利要求书

1.一种核酸检测方法，其特征在于，根据每一个待测核酸设计5’端带有标签序列的上游引物以及5’端偶联有第一配对物的下游引物，然后以所设计的引物PCR扩增待测核酸，扩增产物变性后与包被胶体金的第二配对物结合，再与标记有所述标签序列的检测线结合，根据检测线显色情况进行结果判读；

所述标签序列为不存在发夹结构、序列内部和序列间不形成二聚体、不存在错配、与人类基因组DNA和所述引物之间不存在特异性结合的序列，所述核苷酸序列大小为20-50bp；

所述第一配对物和第二配对物可相互特异性相结合。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，根据每一个待测SNP位点核酸设计两条5’端带有标签序列的上游引物以及一条5’端偶联有第一配对物的下游引物，然后以所设计的引物PCR扩增待测SNP位点核酸，扩增产物变性后与包被胶体金的第二配对物结合，再与标记有所述标签序列的检测线结合，根据检测线显色情况进行结果判读；

所述两条上游引物分别为针对待测SNP位点核酸野生型扩增引物和待测SNP位点核酸突变型扩增引物，且两条上游引物所带有的标签序列不同且不互补。

3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，所述第一配对物为生物素，所述第二配对物为亲和素。

4.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，所述标签序列选自SEQIDNO:1-20。

5.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，还包括：在变性后的扩增产物与包被胶体金的第二配对物结合前，将包被胶体金的第二配对物与在质检线上标记的第一配对物结合。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述质检线为标记有核苷酸序列修饰的第一配对物，所述核苷酸序列为不存在发夹结构、序列内部和序列间不形成二聚体、不存在错配、与人类基因组DNA和所述引物之间不存在特异性结合的序列，所述核苷酸序列大小为20-50bp。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述核苷酸序列选自SEQIDNO:21-25。

8.一种核酸检测方法，其特征在于，根据每一个待测核酸设计5’端带有标签序列和垫片序列的上游引物以及5’端偶联有第一配对物的下游引物，然后以所设计的引物PCR扩增待测核酸，扩增产物与包被胶体金的第二配对物结合，再与标记有反标签序列的检测线结合，根据检测线显色情况进行结果判读；

所述标签序列为不存在发夹结构、序列内部和序列间不形成二聚体、不存在错配、与人类基因组DNA和所述引物之间不存在特异性结合的序列，所述核苷酸序列大小为20-50bp；

所述第一配对物和第二配对物可相互特异性相结合，所述反标签序列和标签序列反向互补配对；

所述垫片序列位于标签序列和上游引物之间起连接作用，且不能与碱基配对。

9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，根据每一个待测SNP位点核酸设计两条5’端带有标签序列和垫片序列的上游引物以及一条5’端偶联有第一配对物的下游引物，然后以所设计的引物PCR扩增待测SNP位点核酸，扩增产物与包被胶体金的第二配对物结合，再与标记有反标签序列的检测线结合，根据检测线显色情况进行结果判读；

所述两条上游引物分别为针对待测SNP位点核酸野生型扩增引物和待测SNP位点核酸突变型扩增引物，且两条上游引物所带有的标签序列不同且不互补。

10.根据权利要求8或9所述方法，其特征在于，所述第一配对物为生物素，所述第二配对物为亲和素。

11.根据权利要求8或9所述方法，其特征在于，所述标签序列选自SEQIDNO:1-20。

12.根据权利要求8或9所述方法，其特征在于，所述垫片序列选自Spacer垫片序列中的一种。

13.根据权利要求8或9所述方法，其特征在于，还包括：在扩增产物与包被胶体金的第二配对物结合前，将包被胶体金的第二配对物与质检线上标记的第一配对物结合。

14.根据权利要求13所述方法，其特征在于，所述质检线为标记有核苷酸序列修饰的第一配对物，所述核苷酸序列为不存在发夹结构、序列内部和序列间不形成二聚体、不存在错配、与人类基因组DNA和所述引物之间不存在特异性结合的序列，所述核苷酸序列大小为20-50bp。