[发明专利]一种核酸检测方法和试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种核酸检测方法和试纸条。

背景技术

近年来，核酸检测在进一步研究遗传性疾病、确定癌变基因及药物抗性筛选方面发挥着重要作用。例如，单核苷酸多态性(SingleNucleotidePolymorphism，SNP)，其是由单个核苷酸-A，T，C或G的改变而引起的DNA序列的改变，造成包括人类在内的物种之间染色体基因组的多样性。这种SNP位点突变的核酸的准确检测为对进一步确诊疾病提供了参考基础。因此对于检测核酸突变在生命科学领域有着无比重要的意义，而核酸检测方法的研究已成为生命科学领域的研究热点之一。

针对现有已知的核酸突变类型主要有以下几种检测方法：

1)Southern印迹法，可以筛选出基因的缺失、插入和移码重组等突变形式。但该技术需要使用到放射性同位素作为标记，危及研发人员的人生安全，再且，分子印迹法检测周期长，操作复杂；

2)直接测序法，测序方法成本高、操作复杂，对于突变比例低于15％～20％的样本，使用测序方法进行检测，就难以发现，再且，一次测序过程中仅可以检测一条序列的碱基组成情况，对于多条序列，则需要分别进行测序，耗时耗力；

3)实时荧光定量PCR，荧光定量PCR技术具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高的特点，但也存在样品易污染、假阳性率高的缺点，且每次只能检测一种突变类型；

4)电泳技术，包括琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳等，其操作简单，检测周期短，但电泳技术只可以区分不同长短的核酸序列，对于具体发生哪个位点的哪种突变，核酸序列的具体组成的确定等，则无法获知；

5)DNA芯片技术，该方法快速简单、自动化程度高，然而，无论是固相芯片还是液相芯片，均需要仪器进行结果的判读，而检测仪器价格昂贵，仪器操作程序复杂，无法进行大规模推广和应用；

6)胶体金技术，胶体金技术由于其独特的光学、电学性质以及生物亲和效应，目前在催化、传感器和DNA分析领域得到广泛的应用，它是免疫亲和技术、印迹技术、免疫标记技术和层析技术的结合，使用时只需插入样本液体，数分钟就可以作出准确的结果判读，目前，市面上的胶体金检测DNA产品，主要是选用DNA抗原从而将DNA包被形成待测抗原，通过使用金标抗体对该待测抗原进行标记，将单克隆抗体包被在检测线处，利用抗原抗体特异性结合的免疫反应原理，在检测线处形成抗体-待测抗原-金标抗体复合物，在对照线处形成抗金标抗体-金标抗体复合物，从而检测目标DNA，该技术中多种抗原和抗体的结合是通过抗原决定簇之间的相互识别来实现的，不同抗原抗体的空间构型不可避免地影响其相互的识别和结合，从而影响到检测的信号强度，再且非特异性的结合也使该技术的假阳性高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种全新的核酸检测的方法和试纸条，提高检测核酸的准确度和简便性；

本发明的另一个目的在于提供一种全新的核酸检测的方法和试纸条，使其可实施多个核酸的并行检测。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种核酸检测方法，根据每一个待测核酸设计5’端带有标签序列的上游引物以及5’端偶联有第一配对物的下游引物，然后以所设计的引物PCR扩增待测核酸，扩增产物变性后与包被胶体金的第二配对物结合，再与标记有所述标签序列的检测线结合，根据检测线显色情况进行结果判读；

所述标签序列为不存在发夹结构、序列内部和序列间不形成二聚体、不存在错配、与人类基因组DNA和所述引物之间不存在特异性结合的序列，所述核苷酸序列大小为20-50bp；

所述第一配对物和第二配对物可相互特异性相结合。以下简称第一种核酸检测方法。

作为优选，所述第一种核酸检测方法为SNP位点核酸检测方法，根据每一个待测SNP位点核酸设计两条5’端带有标签序列的上游引物以及一条5’端偶联有第一配对物的下游引物，然后以所设计的引物PCR扩增待测SNP位点核酸，扩增产物变性后与包被胶体金的第二配对物结合，再与标记有所述标签序列的检测线结合，根据检测线显色情况进行结果判读；

所述两条上游引物分别为针对待测SNP位点核酸野生型扩增引物和待测SNP位点核酸突变型扩增引物，且两条上游引物所带有的标签序列不同且不互补。

基于同样的检测原理，本发明还同时提供另一种检测方案：