[发明专利]用于解淀粉乳杆菌L6高密度培养的培养基及其培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物的培养，特别涉及解淀粉乳杆菌L6的高密度培养的培养基及培养技术。属于微生物培养技术领域。

背景技术

黄浆水为豆腐制作过程中产生的黄色沥水，含有大量水溶性的糖类如水苏糖、棉籽糖等低聚糖，以及异黄酮、蛋白质和维生素等营养物质，非常适合微生物的生长。直接排放不仅会造成资源的浪费，而且会严重污染环境与土壤，因此实现对黄浆水的综合利用引起了国内外科学工作者的关注。

近年来研究发现，豆制品加工过程中产生的黄浆水，在存贮的过程中经自然发酵所生成的酸浆水，是一种良好的豆腐凝固剂，已在部分豆制品生产厂家使用，以酸浆水制成的豆腐色泽微黄、口感鲜嫩，无化学点浆剂的苦涩味，属纯天然食品。但目前使用的酸浆水均为自然发酵，所涉及到的微生物除产酸的乳酸菌外，还含有部分其它的细菌和酵母等，其中也有可能污染蜡样芽孢杆菌、葡萄球菌等杂菌，对豆腐及其制品的食用安全性构成危害。

本实验室从自然发酵的豆腐酸浆中分离得到一株乳酸菌Lactobacillus amylolyticus L6，取得了以下良好结果：

(1)将Lactobacillus amylolyticus L6种子液接入到灭菌的黄浆水中，进行纯种发酵，获得了一种新型的豆腐点浆剂，解决了自然发酵酸浆水中微生物生长杂乱的问题，提高了酸浆豆腐的质量安全性。

(2)该菌株可以直接利用黄浆水中的低聚糖和淀粉等生长产酸，无需补充其它碳源和营养素即可达到点浆剂所需酸度，降低了生产成本。

高密度培养技术，也就是高密度发酵技术。一般来说，高密度培养是指应用一定的培养技术或装置提高菌体的发酵密度，使菌体密度较传统培养方式有显著的提高，从而达到减少培养体积，缩短生产周期，最终提高特定产物的比生产速率，减少设备投资从而降低生产成本，提高在市场上的竞争力。

随着发酵剂的商业化生产和应用的迅速增加，工业发酵的基本目标自然转向了以最小的代价获得最大的产值和利润。而实现这一目标的工程手段是建立相应的高效发酵模式。

解淀粉乳杆菌Lactobacillus amylolyticus L6通过使用MRS液体培养基制备种子发酵液时活菌数不高，另外市售MRS培养基价格较高限制了其在工业生产中的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种原料廉价，解淀粉乳杆菌L6(Lactobacillus amylolyticus L6)的高密度培养基制备的浓缩型发酵剂含有的活菌数高达4.5×10⁹cfu/ml的用于解淀粉乳杆菌L6高密度培养的培养基及其培育方法。

本发明中解淀粉乳杆菌L6(Lactobacillus amylolyticus L6)为本发明人从自然发酵的豆腐酸浆水中提取并分离鉴定的菌种。菌种(株)L6保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址在北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，其菌种保藏编号为：CGMCCNo.9090，保藏日期为2014年4月25日，菌种的分类命名为解淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylolyticus)，保藏证明参见在申请人申请的申请号为201410277246.3的发明专利申请。

本发明使用豆腐黄浆水作为解淀粉乳杆菌L6(Lactobacillus amylolyticus L6)的基础培养基，并对其培养条件进行了研究，旨在提高培养物中解淀粉乳杆菌L6(Lactobacillus amylolyticus L6)的活菌密度，制备廉价的乳酸菌浓缩发酵剂，为进一步利用其制备直投式发酵剂奠定基础。在利用解淀粉乳杆菌L6(Lactobacillus amylolyticus L6)发酵黄浆水，进行工业化生产制备豆腐凝固剂时，乳酸菌浓缩发酵剂的制备就显得尤为重要。乳酸菌浓缩发酵剂制备的关键是要实现对其进行高活性、高密度的培养以及价格低廉。

本发明目的通过如下技术方案实现：

一种用于解淀粉乳杆菌L6的高密度培养的培养基，由基础培养基和营养成分组成，所述基础培养基由豆腐黄浆水经离心去除不溶物形成；以质量份数计，所述营养成分由4-12份蛋白胨、5-20份酵母提取物和7.5-40份玉米淀粉组成；每1升基础培养基加入4-12g蛋白胨，5-20g酵母提取物和7.5-40g玉米淀粉。

优选地，所述营养成分加入基础培养基后还包括灭菌，所述灭菌的温度为120℃-122℃，所述灭菌的时间为15min-20min。

所述每1升基础培养基加入8.2g蛋白胨、10.7g酵母提取粉和22g玉米淀粉。