[发明专利]使用生长因子组合的骨髓干细胞和间充质干细胞之骨生成分化

权利要求书

1.用于从成人骨髓干细胞(BMSC)或成人间充质干细胞(MSC)体外或离体获得骨原细胞、成骨细胞或成骨细胞表型细胞或者包含这些细胞之细胞群的方法，其包括将所述BMSC或MSC与人血浆或血清、成纤维细胞生长因子(FGF)或者其生物活性变体或衍生物、以及转化生长因子β(TGFB)或者其生物活性变体或衍生物相接触。

2.根据权利要求1的方法，其包括以下步骤：

(a)从包含BMSC或MSC的人对象生物样品回收细胞；

(b)任选地，从(a)中回收的细胞分离单个核细胞；

(c)将(a)或(b)的细胞添加至包含人血浆或血清、FGF或者其生物活性变体或衍生物、以及TGFB或者其生物活性变体或衍生物的培养基，并培养该细胞-培养基混合物，从而使细胞贴附至基底表面；

(d)除去未贴附物，并继续在(c)中所限定之培养基中培养贴附细胞，从而获得骨原细胞、成骨细胞或成骨细胞样细胞或者包含这些细胞的细胞群。

3.根据权利要求2的方法，其中在步骤(c)和(d)中培养所述细胞总共约7天至约18天。

4.根据权利要求2或3中任一项的方法，其还包括收集步骤(d)中获得的所述细胞或细胞群。

5.根据权利要求2或3中任一项的方法，其还包括步骤(e)，传代并继续在(c)中所限定之培养基中培养来自步骤(d)的细胞或细胞群。

6.根据权利要求5的方法，其中在步骤(e)中培养所述细胞约3天至约12天。

7.根据权利要求1至6中任一项的方法，其中所述FGF为FGF-1、FGF-2或FGF-3。

8.根据权利要求1至7中任一项的方法，其中所述TGFB为TGFB-1、TGFB-2或TGFB-3。

9.能通过权利要求1至8中任一项的方法获得的人骨原细胞、成骨细胞或成骨细胞表型细胞或者包含这些细胞的分离细胞群。

10.人骨原细胞、成骨细胞或成骨细胞表型细胞或者包含这些细胞的细胞群，其特征在于所述骨原细胞、成骨细胞或成骨细胞表型细胞(1)包含CD90、CD105、CD73、CD63、CD166、碱性磷酸酶(ALP)更具体地为骨-肝-肾型ALP的表达，(2)不表达CD45、CD14、CD19，以及(3)少于15％的细胞表达HLA-DR。

11.根据权利要求10的人骨原细胞、成骨细胞或成骨细胞表型细胞或者包含这些细胞的细胞群，其中所述骨原细胞、成骨细胞或成骨细胞表型细胞还包含骨钙蛋白(OCN)的表达。

12.权利要求9至11中任一项定义的细胞或细胞群，其用于治疗骨相关疾病。

13.根据权利要求12的细胞或细胞群，其中向同种异体对象施用所述细胞或细胞群。

14.药物组合物，其包含权利要求9至11中任一项定义的细胞或细胞群并适用于将所述细胞或细胞群施用在骨损伤部位处。

15.装置，其包含用于将组合物施用在骨损伤部位处的手术器械，还包含权利要求14中定义的药物组合物，其中所述装置适于将所述药物组合物施用在骨损伤部位处。