[发明专利]一种基于荧光共振能量转移检测双酚A的方法

权利要求书

1. 一种基于荧光共振能量转移检测BPA的方法，是基于BPA适配体与BPA特异性结合的原理，利用荧光共振能量转移检测BPA的含量；包括以下步骤：

1）将DNA以8000 r/min的转速离心5 min后，加入50 mmol/L、pH值为7.4的BR缓冲液中充分振荡5-10 min，放入4℃冰箱备用；

2）将步骤1）中的DNA加入到50 mmol/L、pH值为7.4的BR缓冲液中，再加入D1、T1和T2，杂交反应2 h；

3）检测步骤2）反应后溶液的荧光信号，记为初始荧光信号值F₀；

4）向步骤3）检测后的溶液中加入待测溶液，特异性结合10 h；

5）检测步骤4）反应后溶液的荧光信号，记为反应荧光信号值F；

6）根据BPA浓度与荧光强度变化值的线性方程计算出BPA的浓度，进而得出待测溶液中BPA的含量。

2. 根据权利要求1所述基于荧光共振能量转移检测BPA的方法，其特征在于：步骤2）加入DNA后，BR缓冲液中DNA的浓度为1.0×10^-7 mol/L。

3. 根据权利要求1所述基于荧光共振能量转移检测BPA的方法，其特征在于：步骤2）所述D1为BPA适配体探针，其序列为：5’–TGGTCGTTGGTCGTTCGCGTTTCTGGATTT TTTATTTCTGGGGTTCAGTTCTTTTTTGT-3’。

4. 根据权利要求1所述基于荧光共振能量转移检测BPA的方法，其特征在于：步骤2）所述T1为BPA适配体互补链1探针，其序列为：5’–FAM-ATCCAGAAACGCGAACGA-3。

5. 根据权利要求1所述基于荧光共振能量转移检测BPA的方法，其特征在于：步骤2）所述T2为BPA适配体互补链2探针，其序列为：5’-TAMRA-AACTGAACCCCAGAAAT-3’。

6. 根据权利要求1所述基于荧光共振能量转移检测BPA的方法，其特征在于：荧光信号检测所用荧光分光光度仪的设定参数为：激发波长为485 nm，发射波长为500–650 nm，入射狭缝为10 nm，发射狭缝为10 nm，光电倍增管电压为700 V。