[发明专利]一种同时检测玉米中产AFB1、ZEN、DON真菌的方法

权利要求书

1.一种同时检测玉米中产黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和呕吐毒素真菌的方法，其特征在于所采用的引物组合为：一对针对aflR的特异性引物SEQ1和SEQ2；一对针对PKS13的特异性引物SEQ3和SEQ4；一对针对tri5的特异性引物SEQ5和SEQ6；

SEQ1：5'-GCACCCTGTCTTCCCTAACA-3'

SEQ2：5'-ACGACCATGCTCAGCAAGTA-3'

SEQ3：5'-CTGAGAAATATCGCTACACTACCGAC-3'

SEQ4：5'-CCCACTCAGGTTGATTTTCGTC-3'

SEQ5：5'-GCTGCTCATCACTTTGCTCAG-3'

SEQ6：5'-CTGATCTGGTCACGCTCATC-3'

上述引物组合的使用方法如下：

1)常规方法提取玉米样品DNA,进行PCR反应；反应体系为：

10×Taq PCR Buffer(含Mg²⁺)：2.5μL；

dNTP Mix(2.5mM each)：2.0μL；

引物aflR、PKS13、tri5的上游引物各1.0μL，下游引物各1.0μL；

提取到的DNA：500ng；

Taq DNA酶(5U/μL)：0.25μL；

用不含RNA酶的灭菌水定容至25μL。

多重PCR扩增程序如下：

首轮循环：预变性，94℃，2min；

中间循环：变性，94℃，30s；复性，60℃，30s；延伸，72℃，30s；进行30个循环

末轮循环：延伸，72℃，10min；

2)对步骤2)得到的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶检测:如果从样品中扩增出192bp的产物，则待检玉米样品中有产生ZEN的真菌；如果从样品中扩增出400bp的产物，则待检玉米样品中有产生AFB1的真菌；如果从样品中扩增出658bp的产物，则待检玉米样品中有产生DON的真菌。