[发明专利]基于核壳量子点柔性偶联标记物的免疫检测试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及一种基于核壳量子点柔性偶联标记物的免疫检测试剂盒及其使用方法。

背景技术

目前利用酶催化底物显色的酶联免疫检测试剂盒已被大量应用，其基本原理是在试剂盒微孔板上首先包被检测物中抗原的相应抗体，加入待测样本后，使样本中检测物抗原与微孔板上包被的抗体免疫反应后结合，再加入酶标的另一抗体分子形成三明治夹心结构，最终加入底物分子通过酶的高效催化性能使得底物显示，从而判定检测结果。该技术是加入能够作用于底物引起颜色变化的酶标抗体，然后加入相应酶的底物，反应一定时间后，用酶标仪测定反应产物在某一特定波长的吸光度值，再与标准样品进行对比确定样品中待测抗原的浓度。操作繁琐、费时、检测周期长、显色不稳定。

量子点具有激发谱线宽、发射谱线窄、量子尺寸效应、高荧光效率、强光化学稳定性等特性，可以替代酶进行生物标记，用高灵敏的荧光信号代替吸收显色进行检测，制备基于量子点的免疫检测试剂盒。

现有技术中，中国专利公开了一种基于量子点标记的夹心免疫检测法及其诊断试剂盒(公开号1515909)，该试剂盒首先将量子点与抗体分子进行标记，再将量子点标记的抗体连接在抗原上，通过荧光信号进行抗原的检测，该方法简单快速，成本低。然而量子点是一种纳米材料，具有极大的表面效应，现有的利用量子点检测的试剂盒都是将量子点与抗体分子通过静电吸附作用、直接共价连接等方式进行生物标记，在标记抗体的过程中，很容易标记到抗体的具有抗原决定簇部位的Fab端，标记后的抗体不能与抗原分子进行免疫反应，因而是一种无效的标记，这种直接连接技术对于最终的免疫检测的灵敏度，尤其是特异性会有很大程度的影响，降低检测效果，定量检测灵敏度和特异性都无法达到满意结果。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术中基于量子点标记的免疫诊断试剂盒免疫检测灵敏度低、特异性差的技术问题，提供一种基于核壳量子点柔性偶联标记物的免疫检测试剂盒及其使用方法。

本发明的基于核壳量子点柔性偶联标记物的免疫检测试剂盒，所述试剂盒包括蛋白、EDC((1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺))缩合剂、核壳量子点、能与蛋白特异性结合的待测抗原第一抗体和包被待测抗原第二抗体的微孔板；所述蛋白为蛋白G或者蛋白A，所述核壳量子点为CdTe/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnSe或CdSe/ZnS。

优选的是，所述试剂盒还包括缓冲液。

优选的是，所述包被待测抗原第二抗体的微孔板可以由微孔板和待测抗原的第二抗体替代，更进一步的，此时，所述试剂盒还包括1％的脱脂奶粉。

优选的是，所述第一抗体为乙肝表面抗体或者乙肝e抗体，第二抗体为乙肝表面抗体或者乙肝e抗体。

优选的是，所述蛋白、EDC缩合剂、核壳量子点的物质的量比为1:(100-200):1。

优选的是，所述蛋白、能与蛋白特异性结合的待测抗原第一抗体的物质的量比为1:1，所述待测抗原第二抗体的物质的量大于等于蛋白的物质的量。

本发明还提供上述基于核壳量子点柔性偶联标记物的免疫检测试剂盒的使用方法，包括以下步骤：

(1)将蛋白和核壳量子点在EDC缩合剂的作用下进行共价连接，得到核壳量子点标记的蛋白；

(2)将步骤(1)得到的核壳量子点标记的蛋白与能与所述蛋白特异性结合的待测抗原第一抗体混合，得到量子点抗体柔性偶联标记产物；

(3)将含有待测抗原的待测液加入包被待测抗原第二抗体的微孔板中，进行免疫反应，洗涤后，再向微孔板中加入量子点抗体柔性偶联标记产物，进行免疫反应，洗涤后，得到涂有标记产物的微孔板；

(4)检测涂有标记产物的微孔板中核壳量子点的荧光强度，通过与空白样品的荧光光谱进行对比，得到待测抗原的浓度。

优选的是，当包被待测抗原第二抗体的微孔板可以由微孔板和待测抗原的第二抗体替代时，步骤(3)前还包括，将待测抗原第二抗体加入微孔板中，反应后，加入1％的脱脂奶粉封闭微孔板的位点，洗涤，得到包被待测抗原第二抗体的微孔板。

优选的是，所述步骤(2)在23-25℃反应30-60min；所述步骤(3)中免疫反应的温度均为37℃，时间均为0.5-1h。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：