[发明专利]一种多粘类芽胞杆菌发酵生产粘杆菌素的培养基和补料方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种多粘类芽胞杆菌发酵生产粘杆菌素的培养基和补料方法。

背景技术

粘杆菌素系由多粘轩菌培养液中获得的碱性琐环状多肽类（po1ypeptide system）抗生素，是多粘菌素E1和E2的混合物。为白色粉末，易溶于水，耐热， 消化道不易吸收，排泄迅速，毒性小，无副作用，不易产生耐药菌株，是最安全的畜禽促生长抗生素之一。粘杆菌素主要对革兰氏阴性菌有很强的抗菌作用，几乎对所有革兰氏阴性菌有效，对绿脓杆菌有显著作用。治疗时常与抗革兰氏阳性菌的杆菌肽锌合用；用作饲料添加剂可刺激幼畜生长，提高饲料效率，防止肉鸡、猪、牛等畜禽传染性肠炎；防治大肠杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌等革兰氏阴性菌引起的肠道疾病。

目前，国内粘杆菌素的发酵生产采用二级发酵模式，该方式存在的主要问题有以下几点：

1 粘杆菌素发酵水平较低，一般控制在700000u/ml左右。

2 国内发酵生产粘杆菌素的培养基中加入葡萄糖，经高温灭菌，易导致部分葡萄糖碳化，降低还原糖含量，影响发酵液效价。

3 国内粘杆菌素的发酵培养周期较长，一般在120h以上，导致能耗较高。

4 发酵成本较高。

发明内容

本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种有效提高其发酵单位，同时最大限度的降低原辅料对发酵单位的影响，降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现粘杆菌素稳定、高效生产的多粘类芽胞杆菌发酵生产粘杆菌素的培养基；

本发明的另一目的利用上述培养基发酵生产粘杆菌素的补料方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种多粘类芽胞杆菌发酵生产粘杆菌素的培养基，包括种子培养基和发酵培养基，其特征在于

所述种子培养基组成为：麸皮5～10g/L，麦芽提取物10～15g/L，鱼粉2～6g/L，玉米浆11～15ml/L，烘培豆粉15～20g/L，啤酒酵母浸膏10～15g/L，硫酸铵1～5g/L，轻质碳酸钙1～5g/L，橄榄油或菜籽油3～7ml/L；

所述发酵培养基组成为：麸皮9～13g/L，麦芽提取物15～20g/L，鱼粉4～8g/L，玉米浆15～19ml/L，烘培豆粉20～25g/L，啤酒酵母浸膏15～19g/L，硫酸铵4～8g/L，轻质碳酸钙5～9g/L，磷酸二氢钾0.3～0.7g/L，橄榄油或菜籽油15～20ml/L，氯化钠0.2～0.6g/L，硫酸镁0.1～0.5g/L，硫酸亚铁0.1～0.5g/L，消泡剂0.03～0.08ml/L，麦芽糖酶0.002～0.006g/L。

所述消泡剂为乳化硅油、聚氧乙烯、聚氧丙烯季戊四醇醚或聚氧丙烯甘油醚。

所述麦芽提取物是指将啤酒酿造过程中产生的麦芽废渣经闪蒸干燥、浸提、浓缩、真空干燥、粉碎、分筛后所获得的麦芽提取物，其质量要求为：麦芽提取物过80目筛的量超过80%，氨基氮含量超过35%，可溶性蛋白含量达到14%以上。

上述闪蒸干燥：啤酒酿造过程中产生的麦芽废渣加入应用水，其加量为2～4L/kg，加入40～50%的盐酸或硫酸溶液，调节pH至2～3，搅拌40～60h， 过滤得到湿菌渣。启动闪蒸干燥设备，进风温度控制在100～120℃，出风温度控制在40～60℃。闪蒸干燥结束，得到麦芽干渣。

浸提：麦芽干渣中加入有机溶媒，其加入量为干渣重量（kg）:有机溶媒（L）=1:2～3。有机溶媒可以使甲醇或醋酸丁酯或乙酸乙酯。搅拌转速控制在300～500r/min，时间控制在240～300min，提取结束，并过滤，得到浸提液。重复以上操作1次，收集两个批次的浸提液。

降膜浓缩：采用旋转刮板薄膜蒸发器降膜蒸发麦干芽渣浸提液，控制温度100～120℃，浓缩至原体积的20～30%。

真空干燥：浓缩液进行真空干燥，真空度控制在-0.04～-0.08MPa，温度控制在40～60℃，时间控制在180～200min。干燥结束，得到固体麦芽提取物。

粉碎、分筛：麦芽提取物经粉碎机粉碎，并过80目筛。

所述烘培豆粉是指将豆粉在60℃～80℃温度条件下加热80～100min，然后过筛所得，其尿素酶含量≤0.15U。

利用上述培养基发酵生产粘杆菌素的补料方法，其特征是：在发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补氨水、补糖和补水，其中

a 补糖工艺控制：

发酵前10h不用进行补麦芽汁，