[发明专利]一种快速鉴定油葵新葵19号品种纯度的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体说，本发明具体涉及一种快速鉴定油葵新葵19品种纯度的试剂盒的技术领域。

背景技术

向日葵(Helianthus annuus L.)是世界五大经济作物之一，具有耐盐碱、耐干旱、耐瘠薄的特性，也是我国北方地区的主要油料作物，其作为油料或蛋白质资源日益受到人们的重视。我国有相当一部分干旱瘠薄低产田及盐碱地，因而向日葵在农业生产上占有重要地位。世界各国在向日葵杂优利用研究方面普遍开展三系研究，我国从20世纪70年代开展向日葵杂优利用研究，并在农业生产中开始利用杂交种。

随着向日葵育种技术的不断发展和杂交品种的大面积推广，品种鉴定已成为新品种保护及保护农民利益的重要手段。传统的品种鉴定多用形态学方法，是根据作物的形态特征和农艺生理特征鉴定特定的基因型，它是一种最原始的品种纯度检验方法，简单、直观、易观测记载，长期以来形态标记是鉴定杂交向日葵品种的主要手段，但随着育种新技术的不断发展，品种间的形态学差异越来越小，能用于鉴定的形态性状已显不足，增加了鉴定的困难；而且此法鉴定时间长，费用高。近年来，蛋白质和DNA多态性检测技术迅速发展，尤其是DNA多态性检测技术以其检测材料少、时间短、结果稳定性好、重复性高、技术简单、成本低而逐渐成为目前检测的主流方法。

DNA分子检测技术基于DNA分子的缺失、插入、易位、倒位、重排或由于存在长短与排列不一的重复序列机制而产生的多态性(Polymorphism diversity orfingerprints)，从本质上能反映生物个体或种群间基因组中某种差异特征的DNA片段。杂交向日葵品种纯度鉴定应用的分子检测技术有RFLP技术、RAPD技术、SSR技术、AFLP技术。RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism)是由Grodzicker(1974)最早创立的，该技术是利用限制性内切酶酶解不同生物体的DNA分子后，用特异性探针进行Sothern分子杂交，通过放射自显影来揭示DNA的多态性。由于RFLP标记对DNA的需要量较大(5-10ug)，质量要求较高，技术较为复杂，程序繁多，周期长，费用较高，多态有限，对材料需求量大巨有放射性同位素的潜在污染和危害，因而目前尚不宜于用于品种的纯度鉴定。RAPD(Randomly Amplified Polymorphic DNA)技术是以基因组DNA为模板，以一个随机的寡核普酸序列为引物，一般为9-l0bp碱基，通过PCR扩增反应，产生不连续的DNA产物，再经过脂糖凝胶电泳得到多态性的DNA谱带。RAPD技术主要特点是反应灵敏，多态性强，具有简便、快速的优点，既有大量的随机引物可供筛选使用，又不受种属的限制，因而被广泛用于多种作物的品种纯度鉴定。AFLP(Amplify Fragment length Poiymorphism)技术扩增片断长度多态性是RFLP和RAPD两项技术的结合，是由荷兰科学家Zabean等人发明的一项专利技术。AFLP技术具较好的重复性，但操作复杂，步骤多，对实验技能和仪器精度要求均很高，难以在作物品种纯度鉴定上普及。SSR标记在人类及植物的基因组中，均存在着由1-4个碱基对组成的简单重复序列(Simple sequence repeats,简称SSR)，又称之为微卫星(Microsatellite)，SSR技术已广泛应用于玉米、水稻等作物的品种纯度鉴定，SSR最大的优点在于其扩增产物在进行测序胶电泳分离时具有单碱基的高分辨率，能检测到很高的多态性，遗传信息量较大，并具有较好的稳定性和重演性。

油葵新葵19号，是由新疆康地种业科技股份有限公司选育的产量较高、综合经济性状好、抗逆性较强的中晚熟油葵杂交种，2010年通过新疆维吾尔自治区农作物品种审定委员会审定。生育期110天左右，植株茎杆粗壮，幼苗长势强，植株生长整齐，抗旱，籽粒容重高，抗向日葵锈病，耐菌核病，抗褐斑病，抗霜霉病，抗逆性好。

综上所述，从传统的形态鉴定、生化指纹检测发展到分子水平和基因水平检测杂交向日葵品种纯度的检验技术经历了从简单到复杂而精确的过程，每一种方法都有其各自的优点和不足，因而至今在农作物种子检验规程中尚无快速的生化或DNA分子检测技术标准程序。现有技术中未见报道有关鉴定油葵新葵19号品种纯度的试剂盒。

发明内容