[发明专利]以鱼下脚料浸出液培养丹麦角毛藻的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种以鱼下脚料浸出液为主要原料培养丹麦角毛藻的培养基，其特征在于配方如下：鱼下脚料浸出液125毫升，碳酸氢铵2毫克，磷酸二氢钾3毫克，谷氨酸钠1毫克，苯甲酸钠0.4毫克，海洋酵母1毫克，尿素1毫克，牛粪浸出液1毫升，蛋白粉15毫克，牛磺酸10毫克，酵母锌5毫克，酪氨酸0.5毫克，羟丙基甲基纤维素3毫克，L-精氨酸2毫克，麦饭石粉4毫克，920植物生长刺激素8国际单位，维生素S-3溶液1毫升，M-F微量元素溶液1毫升，葡萄糖酸亚铁3毫克，蜂胶2毫克，罗汉果甜苷6毫克，硬脂酸镁8毫克，柠檬酸2毫克，土壤浸出液1毫升，海泥浸出液1.5毫升，臭氧消毒的纯净海水1000毫升。

2.一种以鱼下脚料浸出液为主要原料养殖丹麦角毛藻的方法，其特征在于具体步骤如下：

培养容器为容积65升白塑料桶，市场有售，食品级高密度聚乙烯材料制成，无缝一体式结构，坚固耐用，抗冲击，有良好透光性，以利丹麦角毛藻进行光合作用，水桶顶部有一圆形盖子，上有旋丝，可旋转而密封，盖子打上3个孔，一个孔插入充气管，另一个孔插入排气管，充气管和排气管都是玻璃管，内径6毫米，还有一个孔穿入一根金属导线，导线末端接一个40w节能灯，将塑料桶洗刷干净，后用蒸馏水润洗3遍，装入权利要求1所述的培养基40升，充气混合10分钟，选择生命力旺盛、无污染的丹麦角毛藻接种，接种密度5×10⁴cell/mL，盖子上插入两根干净玻璃管，一根较长，50厘米，顶端露出盖子12厘米，下端通过料管与散气石连接，用以充气(散气石的作用是形成很小的气泡，避免大气泡或翻滚的波浪打碎藻细胞)，另一根较短，15厘米，两端露出盖子即可，用以排气，两根玻璃管同样粗细；用干净的透明胶带将两根玻璃管固定，长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气∶纯二氧化碳∶臭氧∶甲烷＝92％∶6％∶1％∶1％，连续充气，充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可，室外培养，太阳光照射，最佳温度24±2℃，最佳光照强度3000-9000Lux，夜间打开节能灯进行照明，培养的前5天，水桶上方搭建一简易棚，上放置帘子遮挡光线，使光照强度维持在2000-4000Lux，避免强烈阳光对细胞造成的光伤害，第6天撤掉帘子，较强的光照有利于细胞的生长繁殖和高不饱和脂肪酸的合成，培养至第7天，停止充气，拿开盖子，补充新鲜培养基5升，以弥补蒸发掉的水分，盖上盖子，充气，继续培养，至第10天，丹麦角毛藻密度增加至700×10⁴cell/mL，停止培养，将藻液倒出，将白塑料桶洗刷干净后，加入消毒液消毒30分钟，后进入下一轮培养；

所述消毒液由以下重量比的物质组成：每100份85％乙醇中加入以下重量份的中药材和辅料：土荆皮30～50份、杠板归15～25份、黄柏15～25份、苦参5～15份、艾叶5～15份、辅料3-5份；消毒液制作方法：将土荆皮、杠板归、黄柏、苦参、艾叶分别切碎，于60-70℃下烘干，再用中药材粉碎机分别粉碎至70目备用；分别称取以重量份计烘干并粉碎的土荆皮30～50份、杠板归15～25份、黄柏15～25份、苦参5～15份、艾叶5～15份，置于三角烧瓶中充分混合后，加入100份85％乙醇，浸泡48小时，200筛绢过滤，将清液静置沉淀36小时，撇去液面漂浮物，取中上层的清液备用，在上述清液中加入辅料3-5份混合搅拌均匀得到消毒液，所述辅料为半胱氨酸盐酸盐、硫酸钠、维生素C的混合物，混合比例为重量比2∶1∶1；将所述消毒液密封于黑色试剂瓶中，贴上标签，置于4℃冰箱备用。

3.根据权利要求2所述的一种以鱼下脚料浸出液为主要原料养殖丹麦角毛藻的方法，其特征在于，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10-20分钟。

4.根据权利要求2所述的一种以鱼下脚料浸出液为主要原料养殖丹麦角毛藻的方法，其特征在于，对选用的所述白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压氮气喷射消毒，消毒5-10分钟。

5.根据权利要求2所述的一种以鱼下脚料浸出液为主要原料养殖丹麦角毛藻的方法，其特征在于，对选用的白塑料桶，洗刷干净后进行消毒，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒5-6分钟。

6.根据权利要求2所述的一种以鱼下脚料浸出液为主要原料养殖丹麦角毛藻的方法，其特征在于，对选用的白塑料桶，洗刷干净后分两个阶段消毒，先使用高压氮气喷射消毒，消毒2-3分钟，使用高压二氧化碳喷射消毒，消毒2-3分钟，消毒完毕后再进行藻类培养。