[发明专利]一种基于“睡美人”转座子系统制作高效转染各类细胞的方法在审
| 申请号： | 201410436949.6 | 申请日： | 2014-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN104195112A | 公开（公告）日： | 2014-12-10 |
| 发明（设计）人： | 杨柳;苏晓三;王翼寅;陈睿;张蕾 | 申请（专利权）人： | 昆明市第一人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/63 |
| 代理公司： | 无 | 代理人： | 无 |
| 地址： | 650000 云南省昆明市*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 睡美人 座子 系统 制作 高效 转染 各类 细胞 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种基于“睡美人”转座子系统制作高效转染各类细胞的方法，其特征在于：
（1）利用 BglⅡ和NotⅠ酶切位点以及NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点在pT/HB转座子载体上加入长度为589bp的CMV启动子和长度为720bp的EGFP（增强型绿色荧光蛋白）基因，构建全长为4849bp的pT-CMV-EGFP重组载体；
（2）利用脂质体转染pT-CMV-EGFP转座子及辅助转座酶SB11，脂质体的用量为总DNA质量的3-4倍，转座酶SB11与转座子pT-CMV-EGFP质量比1:4体系转染贴壁细胞3T3，悬浮细胞H22和原代培养细胞DC。
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