[发明专利]一种微流控多色荧光细胞计数仪

权利要求书

1.一种微流控多色荧光细胞计数仪，包括微流控芯片系统、荧光成像系统和分析计数系统；所述的微流控芯片系统包括微流控芯片(3)、计算机(19)控制的控制器(18)和管道(20)；所述的荧光光源系统包括两种或以上激光器，如激光器A(9)和激光器B(12)、荧光探测的物镜(8)、和信号处理的摄像机(17)；所述的分析计数系统包含计算机(19)。

2.根据权利要求1所述的细胞计数仪，其特征在于，所述的微流控芯片系统还可选地含有载物台(4)、电机(5)、导轨(6)和丝杆(7)之一或以上。

3.根据权利要求1所述的细胞计数仪，其特征在于，所述的荧光成像系统还可选地含有照明光源(1)、聚光镜(2)、物镜(8)、扩束镜A(10)、二向色镜1(11)、扩束镜B(13)、二向色镜2(14)、滤光片转轮(15)之一或以上。

4.根据权利要求1所述的细胞计数仪，其特征在于，所述的物镜(8)优选40倍光学物镜，所述的激光器A(9)优选405nm，所述的激光器B(12)优选488nm。

5.根据权利要求1所述的细胞计数仪，其特征在于，所述的微流控芯片(3)的材质为硅酮；具有三维结构；芯片厚度小于50微米；芯片内样品容量小于10微升；芯片表面采用EpCAM抗体修饰。

6.根据权利要求1所述的细胞计数仪，其特征在于，所述的荧光光源系统设两种荧光激发光源；所述激光器(A)荧光激发光源激发被4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色的细胞，产生蓝色荧光；所述激光器(B)荧光激发光源激发被异硫氰酸荧光素(FITC)和藻红蛋白(PE)染色的细胞，分别产生绿色荧光和红光荧光。

7.一种微流控多色荧光细胞计数仪的制备方法，包括以如下步骤制备微流控芯片(3)，

1)旋涂光刻胶于硅片表面，固化，紫外曝光后显影，制作微流控芯片(3)模板；

2)硅酮(PDMS)按A:B为5:1混合，在真空中脱气，倒入置有模具的培养皿中，倒胶厚度5毫米，80℃加热固化60min后将PDMS与模具分离；

3)打孔，将上下两层PDMS对准，粘合；80℃烘烤1小时。

8.权利要求1所述的细胞计数仪用于血液中循环肿瘤细胞的计数和图像分析。

9.权利要求1所述的细胞计数仪用于结直肠癌循环肿瘤细胞计数。

10.权利要求1所述的细胞计数仪的应用，包括预先进行循环肿瘤细胞磁分离及鉴定；或者，包括在微流控芯片(3)内进行细胞形态及荧光标记状态分析。