[发明专利]酪氨酸类似物翻译系统和基因编码的蛋白质光致电子转移荧光传感器蛋白家族

权利要求书

1.SEQ ID NO：11所示的正交氨酰基-tRNA合成酶，其用3，5-二氯代酪氨酸优先氨酰化与之配对的正交tRNA，从而在翻译的氨基酸序列中插入3，5-二氯代酪氨酸。

2.一种表达包含至少一个3，5-二氯代酪氨酸的突变蛋白的3，5-二氯代酪氨酸翻译试剂盒，所述试剂盒包含：

(i)3，5-二氯代酪氨酸；

(ii)权利要求1所述的正交氨酰基-tRNA合成酶；

(iii)正交tRNA，其为SEQ ID NO：9所示的多核苷酸序列；其中所述正交氨酰基-tRNA合成酶用所述3，5-二氯代酪氨酸优先氨酰化所述正交tRNA；和

(iv)编码目标蛋白的核酸，其中所述核酸含有所述正交tRNA特异性识别的至少一个选择密码子。

3.如权利要求2所述的翻译试剂盒，其特征在于，所述正交tRNA是琥珀抑制型tRNA，所述选择密码子是琥珀密码子。

4.一种宿主细胞，其是包含编码权利要求1所述的正交氨酰基-tRNA合成酶的核苷酸序列和SEQ ID NO：9所示的正交tRNA序列的真细菌细胞。

5.如权利要求4所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是包含编码权利要求1所述的正交氨酰基-tRNA合成酶的核苷酸序列和SEQ ID NO：9所示的正交tRNA序列的大肠杆菌细胞。

6.一种产生在至少一个所选位置定点特异插入3，5-二氯代酪氨酸的突变蛋白的方法，所述方法包括下述步骤：

(a)提供权利要求2所述的3，5-二氯代酪氨酸翻译试剂盒，该试剂盒包含：

(i)3，5-二氯代酪氨酸；

(ii)权利要求1所述的正交氨酰基-tRNA合成酶；

(iii)正交tRNA，其为SEQ ID NO：9所示的多核苷酸序列；其中所述正交氨酰基-tRNA合成酶用所述3，5-二氯代酪氨酸优先氨酰化所述正交tRNA；和

(iv)编码所述目标蛋白的核酸，其中所述核酸在所选的位置包含所述正交tRNA特异性识别的至少一个选择密码子；和

(b)将编码所述目标蛋白的核酸转化到权利要求4或5所述的宿主细胞中，在所述蛋白的翻译期间，3，5-二氯代酪氨酸氨酰化的正交tRNA对所述选择密码子起反应而将培养基中的3，5-二氯代酪氨酸定点特异插入所述目标蛋白的所述所选位置，从而产生在所选位置含3，5-二氯代酪氨酸的所述目标蛋白。

7.一种在野生型黄素蛋白iLov第99与100位氨基酸位点之间特异性插入3，5-二氯代酪氨酸的方法，所述方法通过权利要求6的步骤进行，并且由此得到的插入3，5-二氯代酪氨酸的黄素蛋白iLov变体的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示，其中第100位的X表示插入的3，5-二氯代酪氨酸。