[发明专利]一种烟草角斑病菌的分子鉴定引物及鉴定方法有效
| 申请号： | 201410445480.2 | 申请日： | 2014-09-03 |
| 公开（公告）号： | CN104212896A | 公开（公告）日： | 2014-12-17 |
| 发明（设计）人： | 万秀清;乔婵;李若;李丽杰;王春军;元野;贺国强;颜培强;李尊强;郭思达;孙宏伟;焦玉生;李恒全;邱恩建;刘德育;陈荣平;黄磊;张海霞;刘伟;魏继承 | 申请（专利权）人： | 中国烟草总公司黑龙江省公司牡丹江烟草科学研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京正理专利代理有限公司 11257 | 代理人： | 赵晓丹 |
| 地址： | 157011 黑龙江*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 烟草 角斑病 分子 鉴定 引物 方法 | ||
1.一组烟草角斑病菌的分子鉴定引物，其特征在于，该引物如序列表SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：2所示，其中，序列SEQ ID NO：1为鉴定烟草角斑病菌的上游引物，序列SEQ ID NO：2为鉴定烟草角斑病菌的下游引物。
2.一种烟草角斑病菌的鉴定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)烟草角斑病菌分离培养；
(2)PCR扩增；其中，PCR扩增时的引物为序列SEQ ID NO：1所示的用于鉴定烟草角斑病菌的上游引物，序列SEQ ID NO：2所示的用于鉴定烟草角斑病菌的下游引物；
(3)PCR扩增产物分离及结果判别。
3.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，烟草角斑病菌分离培养的具体步骤为：用灭菌的剪刀将烟草角斑病疑似病叶病斑剪下，消毒后置于LB固体培养基中25℃培养2-3天，收集病斑周围长出的细菌菌落于无菌的LB液体培养基中，混匀后，吸取菌液涂LB固体平板，25℃培养2-3天，挑取单菌落于LB液体培养基中，25℃培养，用于PCR检测，或者直接用灭菌牙签蘸取单菌落用于PCR检测。
4.根据权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，PCR扩增产物分离及结果判别的具体步骤为：将PCR扩增产物用1.5％琼脂糖电泳分离，于紫外分析仪中根据扩增产物的大小判定结果。
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