[发明专利]凝血因子Ⅸ质控品制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及临床凝血检验制剂的制备方法，具体凝血因子IX质控品制备方法。

背景技术

凝血因子IX测定具有重要的临床意义。随着凝血因子IX活性检验项目不断拓展到疾病诊断和治疗中的各个领域，使用凝血因子IX质控品对凝血因子IX活性检测进行室内质控和室间质评就显得尤其重要。目前针对凝血因子IX检测的试剂、仪器较多，不同的试剂和检测仪器、检测原理各不相同，导致其结果差别很大。无论采用何种方法，进行室内质控和参加室间质评是保障检测结果具有良好重复性和可比性的必要手段，而这些质量保证措施的开展都离不开凝血因子IX质控品。

目前临床实验室使用的凝血质控物通常为多参数凝血质控品，其异常值凝血质控品除凝血因子IX水平异常外其它参数也为异常，难以保证病理性样本凝血因子IX测定结果的准确性，同时也难以保证凝血因子IX室内质控和室间质评的有效性。

国内凝血质控品几乎被国外试剂厂商垄断，产品价格昂贵且水平单一，无法满足临床检验多活性水平的需求，因此，研发生产国内自主品牌的多个浓度水平的凝血因子IX质控品迫在眉睫。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一种制备凝血因子IX质控品的方法及获得凝血因子IX质控品。本发明方法制备的凝血因子IX质控品为凝血因子IX多个浓度水平，且其它凝血因子含量在正常范围；该产品均一性和稳定性较好，满足临床对凝血因子IX质控品检验的质量控制要求。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：凝血因子IX质控品制备方法，包括以下步骤：

(1)将人静脉采集的血液与抗凝剂以体积比为9∶1加入混合，在2℃～8℃条件下离心15分钟，相对离心力为2500g，分离吸取上层血浆，将多人份血浆混合，即得多人份混合血浆；抗凝剂为枸橼酸三钠溶液，其浓度为0.109mol/L～0.129mol/L。

(2)免疫亲和层析柱预先用缓冲液在10℃～18℃条件下平衡，缓冲液包括0.02mol/L Tris、0.15mol/L NaCl、8mmol/L MgCl₂，pH7.25。

(3)原料血浆加入MgCl₂后，原料血浆中MgCl₂浓度为4.5～5.5mmol/L。上免疫亲和层析柱，收集免疫亲和层析柱下方流出的血浆，即为缺乏凝血因子IX血浆。

(4)将缺乏凝血因子IX血浆与多人份混合血浆按照要求比例混合，即可制备成不同浓度水平的凝血因子IX质控品。

(5)将制备的凝血因子IX质控品加入冻干保护剂，分装，冷冻干燥。加入的冻干保护剂，包括质量比例占凝血因子IX质控品的0.5～1.5％Hepes、l～5％甘氨酸、0.5～5％甘露醇。

本发明提供的凝血因子IX质控品制备方法，用抗人凝血因子IX单克隆抗体免疫亲和层析柱将多人份混合血浆进行亲和层析，去除多人份混合血浆中的凝血因子IX即为缺乏凝血因子IX血浆；再将多人份混合血浆与缺乏凝血因子IX血浆按照一定比例混合，制备成凝血因子IX含量为不同浓度水平的凝血因子IX质控品，加入冻干保护剂，分装，冷冻干燥，获得凝血因子IX质控品。

本发明提供的制备方法中，抗人凝血因子IX单克隆抗体免疫亲和层析柱的制备方法为将一种能够高度特异性的连接凝血因子IX的单克隆抗体偶联至经CNBr活化的Sepharose4B琼脂糖凝胶上，组成免疫亲和层析柱。在Mg²⁺存在的条件下，当血浆通过该免疫亲和层析柱时，唯独凝血因子IX被吸附，其他凝血因子的活性基本未变。

本发明制备的凝血因子IX质控品，其产品均一性、稳定性及冻干品复融后稳定性好，可代替进口产品用于凝血因子IX检测的质量控制，有利于降低检测成本，提升我国对凝血因子IX检测的能力。

具体实施方式

结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例以制备活性为30％的凝血因子IX质控品为例。

(1)将人静脉采集的血液与抗凝剂以体积比为9∶1加入混合，在2℃～8℃条件下离心15分钟，相对离心力为2500g，分离吸取上层血浆，将多人份血浆混合，即得多人份混合血浆；抗凝剂为枸橼酸三钠溶液，其浓度为0.109mol/L～0.129mol/L。

(2)免疫亲和层析柱预先用缓冲液在10℃～18℃条件下平衡，缓冲液包括0.02mol/L Tris、0.15mol/L NaCl、8mmol/L MgCl₂，pH7.25。