[发明专利]一种30分钟内提取土壤微生物基因组DNA的试剂盒

权利要求书

1.一种三十分钟内快速提取土壤微生物基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：

（1）Buffer A溶液的配置：pH=5-6、0.5-2M Tris-HCl ；

（2）Buffer B溶液的配置：0.1-0.3M Al₂(SO₄)₃ ；

（3）Buffer C溶液的配置：3-5M NaOH；

（4）Buffer D溶液的配置：pH=7-9、0.1-0.2M Tris-HCl；

（5）Buffer E溶液的配置：300-350μl、10wt.%SDS；

（6）Buffer F溶液的配置：称取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-4g EDTA，加入双蒸水溶解并调节至pH=7.5-8.5，定容至100ml；

（7）去蛋白液溶液配制：4-6M盐酸胍，15-25 mM Tris-HCl，pH6.5-7.0，使用前加入乙醇，乙醇浓度为35-40wt.％；

（8）漂洗液溶液配制：15-25mM NaCl，1-3mM Tris-HCl，pH7.0-8.0；

（9）洗脱液溶液配制：5-15mM Tris-HCl，pH8.0-9.0。

2.根据权利要求1所述的一种三十分钟内快速提取土壤微生物基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括如下：

（1）Buffer A溶液的配置：pH=5.5、1M Tris-HCl ；

（2）Buffer B溶液的配置：0.2M Al₂(SO₄)₃ ；

（3）Buffer C溶液的配置：4M NaOH；

（4）Buffer D溶液的配置：pH=8、0.1M Tris- Tris-HCl；

（5）Buffer E溶液的配置：325μl、10%SDS；

（6）Buffer F溶液的配置：称取2.416g LiCl，1.211g Tris，3.506g EDTA，加入双蒸水溶解并调节至pH=8.0，定容至100ml；

（7）去蛋白液溶液配制：5M盐酸胍，20 mM Tris-HCl，pH6.6，使用前加入乙醇，乙醇浓度为38wt.％；

（8）漂洗液溶液配制：20mM NaCl，2mM Tris-HCl，pH7.5；

（9）洗脱液溶液配制：10mM Tris-HCl，pH 8.5。

3.一种如权利要求1或2所述的试剂盒提取土壤微生物基因组DNA的方法，其特征在于：所述方法包括土壤样品的前处理，土壤微生物基因组DNA的提取和纯化。

4.根据权利要求3所述的试剂盒提取土壤微生物基因组DNA的方法，其特征在于：具体步骤为：

（1）土壤样品的前处理：用天平称取0.5g的土壤于2ml的离心管中，加入100μl Buffer A，600μl无菌水，300μl Buffer B，涡旋震荡30s；加入100μl Buffer C，300μl Buffer D，涡旋震荡30s；8000g 离心2min，去上清；

（2）土壤微生物基因组DNA的提取和纯化：加入325μl Buffer D，0.5g 0.5mm玻璃珠，325μl Buffer E，325μl Buffer F，涡旋震荡1min，4℃ 11000g 离心2min，吸取750ul上清至1.5ml离心管，加入750μl酚：氯仿：异戊醇=25:24:1，涡旋震荡30s，4℃ 16000g 离心1min，将上清转移至1.5ml离心管，加入等体积的沉淀剂，将样品加到硅基质膜核酸纯化柱上，12000 g 离心30s，弃废液，加入500μl去蛋白液，12000 g 离心30s，加入500μl漂洗液，12000 g 离心30s，吹干，加入50μl 洗脱液，于1%琼脂糖凝胶中电泳检测。