[发明专利]一种30分钟内提取土壤微生物基因组DNA的试剂盒

说明书

技术领域

本发明提供一种30分钟内提取土壤微生物基因组DNA的试剂盒，属于生物技术领域。

技术背景

土壤除了为陆生植物提供营养源和水分之外，还是植物生长，进行光合作用、能量交换的主要场所；同时也具有微生物生长繁殖所需要的一切营养物质及各种条件，是微生物良好的生活场所，有“微生物的天然培养基”之称。

土壤是微生物的主要栖息地，是自然环境中最复杂的异质体系，这决定了土壤微环境的多样化和土壤微生物的高度多样性。每克土壤含有大约10⁷个原核生物细胞，但仅有0.1%～10%的土壤微生物是可以培养的。在微生物学研究领域中，因为99%以上的微生物都是目前未(难)被纯培养的，过去人们对微生物世界的认识基本上都集中在不到1%的微生物上。对这些未培养微生物多样性及群落功能的研究将大大扩展我们对生命的了解，包括了解生命如何耐受极端环境、新的生物能源、生命进化以及微生物与环境之间的相互作用。

微生物环境基因组学为最大限度地挖掘微生物资源带来了前所未有的机遇，已经成为国际生命科学技术研究和开发最重要的热点和前沿。为了充分认识不可培养微生物的丰富资源，结合现代分子生物学技术的发展，已建立起了许多不需要对微生物进行独立培养的新方法和新技术。如变性梯度凝胶电泳(DGGE)法是将目标基因进行PCR扩增,通过对PCR产物进行分离和鉴定分析土壤微生物群落结构的组成信息；随机扩增多态性DNA技术(RAPD)是应用不同的随机引物在非严格的条件下进行PCR扩增，通过分析PCR产物在凝胶电泳上的条带多态性来反映样品中微生物的多样性。

关于土壤微生物基因组学技术的构建已有许多研究报道，主要的突破在于需要足够高质量的DNA，因此直接从土壤环境中提取和纯化DNA是其中最关键的步骤。土壤微生物基因组学技术在我国土壤及环境微生物生态学方面的研究才刚起步，对这一新技术的跟踪和应用，将会有力地促进我国土壤微生物生态学研究的发展。因此，研究一种高效提取土壤微生物基因组DNA的试剂盒，对于大规模开展土壤微生物基因组学研究显得十分必要。

发明内容：

本发明提供一种30分钟内提取土壤微生物基因组DNA的试剂盒，利用该试剂盒能够高效、快速提取土壤微生物DNA，所提取得到的DNA纯度高、浓度高。

一种三十分钟内快速提取土壤微生物基因组DNA的试剂盒，所述试剂盒包括：

（1）Buffer A溶液的配置：pH=5-6、0.5-2M Tris-HCl ；

（2）Buffer B溶液的配置：0.1-0.3M Al₂(SO₄)₃ ；

（3）Buffer C溶液的配置：3-5M NaOH；

（4）Buffer D溶液的配置：pH=7-9、0.1-0.2M Tris-HCl；

（5）Buffer E溶液的配置：300-350μl、10wt.%SDS；

（6）Buffer F溶液的配置：称取2-3g LiCl，1-2g Tris，3-4g EDTA，加入双蒸水溶解并调节至pH=7.5-8.5，定容至100ml；

（7）去蛋白液溶液配制：4-6M盐酸胍，15-25 mM Tris-HCl，pH6.5-7.0，使用前加入乙醇，乙醇浓度为35-40wt.％；

（8）漂洗液溶液配制：15-25mM NaCl，1-3mM Tris-HCl，pH7.0-8.0；

（9）洗脱液溶液配制：5-15mM Tris-HCl，pH8.0-9.0。

上述试剂盒的优选配方：

（1）Buffer A溶液的配置：pH=5.5、1M Tris-HCl ；

（2）Buffer B溶液的配置：0.2M Al₂(SO₄)₃ ；

（3）Buffer C溶液的配置：4M NaOH；

（4）Buffer D溶液的配置：pH=8、0.1M Tris- Tris-HCl；

（5）Buffer E溶液的配置：325μl、10%SDS；

（6）Buffer F溶液的配置：称取2.416g LiCl，1.211g Tris，3.506g EDTA，加入双蒸水溶解并调节至pH=8.0，定容至100ml；

（7）去蛋白液溶液配制：5M盐酸胍，20 mM Tris-HCl，pH6.6，使用前加入乙醇，乙醇浓度为38wt.％；