[发明专利]一种检测人基质金属蛋白酶‑12活性的荧光多肽底物

权利要求书

1.一种检测人基质金属蛋白酶-12活性的荧光多肽底物，其特征在于：包括如PeptideⅠ所示的氨基酸序列，并且其氨基酸序列N端第1位的异亮氨酸的氨基和第12位的赖氨酸的氨基分别结合有荧光基团和荧光猝灭基团。

2.根据权利要求1所述的检测人基质金属蛋白酶-12活性的荧光多肽底物，其特征在于：所述结合的荧光基团和荧光猝灭基团是，与第1位异亮氨酸的氨基结合的荧光基团5—羧基荧光素，与第12位的赖氨酸的氨基结合的荧光猝灭基团5—羧基四甲基若丹明。

3.根据权利要求2所述的检测人基质金属蛋白酶-12活性的荧光多肽底物，其特征在于：在PH为7.4的50mM Tris， 20 mM CaCl₂，200mM NaCl，0.005%Brij-35，温度为37℃的反应体系下，MMP-12催化荧光多肽底物反应的酶促反应动力学常数K_m为35μM，k_cat为1.24s^-1，k_cat/K_m为35428M^-1.s^-1。

4.根据权利要求3所述的检测人基质金属蛋白酶-12活性的荧光多肽底物，其特征在于： MMP-9酶切所述荧光多肽底物k_cat/K_m的6.4倍，MMP-1、3与所述的荧光多肽底物反应趋近为零。

5.一种如权利要求1所述的荧光多肽底物在检测人血清中MMP-12活性的应用。

6.根据权利要求5所述的荧光多肽底物在检测人血清中MMP-12活性的应用，其特征在于检测方法为：取待测血浆样品与过量的所述荧光多肽底物在反应缓冲液中混合，并在黑色96孔板上建立100μl的反应体系，然后在所述荧光多肽底物所结合荧光基团相应的激发光波长和发射光波长下，检测反应体系的荧光强度，根据荧光强度的变化速率，从标准曲线中计算出蛋白酶活性，以单位质量蛋白酶裂解底物的速率μmol/L.s.mg表示。

7.根据权利要求6所述的荧光多肽底物在检测人血清中MMP-12活性的应用，其特征在于：所用的荧光多肽底物浓度为18μM。

8.根据权利要求6所述的荧光多肽底物在检测人血清中MMP-12活性的应用，其特征在于：对应荧光发光基团5—羧基荧光素的激发光波长为485nm，发射光波长为538nm。

9.根据权利要求6所述的荧光多肽底物在检测人血清中MMP-12活性的应用，其特征在于：所述反应缓冲液包括PH为7.5的50mM Tris，20 mM CaCl₂，200mM NaCl，0.005%Brij-35。

10.根据权利要求6所述的荧光多肽底物在检测人血清中MMP-12活性的应用，其特征在于：待测血浆样品与过量的所述荧光多肽底物在反应缓冲液中混合反应是在37℃进行。

11.一种如权利要求1所述的检测人基质金属蛋白酶-12活性的荧光多肽底物试剂盒，其特征在于：包含有所述的荧光多肽底物。

12.根据权利要求11所述的荧光多肽底物试剂盒，其特征在于：试剂盒所对应的反应缓冲液包括PH为7.5的50mM Tris，20 mM CaCl₂，200mM NaCl，0.005%Brij-35。

13.根据权利要求11所述的荧光多肽底物试剂盒，其特征在于：试剂盒所对应的反应在37℃进行。