[发明专利]基于ABCC3基因的小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的检测方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的PCR引物对，其特征在于：

所述引物对的序列为：正向引物如SEQ ID NO.2所示，反向引物如 SEQ ID NO.3所示。

2.一种用于检测小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的PCR检测试剂盒，其特征在于：

所述试剂盒包含权利要求1所述的引物对。

3.一种检测小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的PCR检测方法，其特征在于：

其采用如权利要求1所述的引物对或权利要求2所述的试剂盒进行PCR，具体包括以下步骤：

(1)提取待测小菜蛾的RNA样品，并反转录为cDNA模板；

(2)将所述cDNA模板加入到含有所述引物对的PCR反应液中得到PCR反应体系；

(3)进行实时荧光定量PCR检测；

其中，PCR过程完成后，按0.l℃·s^-1的升温速率从72℃升至95℃进行融解曲线的分析验证，具体过程为：95℃进行15 s，然后60℃进行1 min，接着95℃进行30 s，最后再在60℃进行15 s；

若所述待测小菜蛾的样品产生典型的“S”型扩增曲线及单峰融解曲线，且△Ct值≥7，则说明所述小菜蛾待测的样品对Bt杀虫蛋白Cry1Ac产生抗性；若△Ct值≤6，则说明待测小菜蛾的样品未对Bt杀虫蛋白Cry1Ac产生抗性，其中△Ct值就是靶标基因ABCC3与内参基因L32之间的Ct值的差值。

4.如权利要求3所述的检测小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的PCR检测方法，其中，所述实时荧光定量PCR检测的扩增程序为：94℃预变性15 min，94℃变性15 sec，55℃退火30 sec，72℃延伸32 sec，40个循环。

5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述待测小菜蛾的RNA样品为小菜蛾4龄幼虫中肠的RNA样品。