[发明专利]药用菊叶薯蓣组培一步成苗批量化生产的方法

说明书

技术领域

本发明属于药用菊叶薯蓣的组培技术领域，具体涉及一种药用菊叶薯蓣组培苗批一步成苗批量化生产的方法。

背景技术

薯蓣是一种多年生藤本植物，主要分布于亚洲(中国、印度、缅甸)和美洲(墨西哥、美国、巴西)的热带、亚热带地区，尤以中国和墨西哥居多。据记载，全球薯蓣科植物约650种，我国62种，墨西哥菊叶薯蓣(Dioscorea composite Hemsl.)是产量和皂素含量最高的一个品种。

薯蓣属植物(Dioscorea)具有重要的药用价值，其根茎皂甙元是目前世界上合成避孕药、镇疼消炎药、麻醉药、肾上腺皮质激素、性激素以及蛋白同化激素等300多种甾体类药物的起始原料，被医药界称之为“药用黄金”；在医药工业中占有重要地位。而且薯蓣块茎中的淀粉是生产工业酒精的原料，也是一种较好的生物能源。

组培快繁是近些年来在种苗繁殖过程中应用得最为广泛的一门新兴实用技术，目前，世界上已有几千种植物通过组织培养获得成功，但能大量应用于生产并能产生经济效益的仅有几十种，如香蕉、甘蔗、兰花、非洲菊、马铃薯等。其主要原因有两个方面：一是取决于市场需求及批量；二是生产的技术和成本。菊叶薯蓣的组培繁殖同其他种苗的组培繁殖一样，提高炼苗成活率、建立高效稳定的组培繁殖方法、降低生产成本就成了能否进行产业化生产的关键。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效低耗量的菊叶薯蓣组织培养方法，该方法配方效果佳，培养周期短，易操作，培养程序简单，培养效率高，稳定性好、生产成本低，是一种在最短的时间内获得大量试管苗的快速繁殖方法。而且本发明方法不污染环境，非常适合工业化生产，已达到产业化水平。

本发明的目的是通过以下方式实现的：

药用菊叶薯蓣组培一步成苗批量化生产的方法，依次包括以下步骤：

(1)外植体的选择与接种：选用菊叶薯蓣幼嫩器官经组织培养获得的2～3cm高且生长健壮、长势均匀、品质良好的无菌试管苗为材料；然后将菊叶薯蓣无菌试管苗的叶片接种在MS大量+2×MS微量+MS有机+2×MS铁盐+6-BA1.0～5.0mg/L+NAA0.2～0.8mg/L+IBA0.2～0.8mg/L+GA₃0.1～0.8mg/L+3％蔗糖+0.75％琼脂固体培养基上，获得根叶俱全的试管苗；

(2)增殖生根：将步骤(1)获得的不定芽转接在MS+6-BA0.1～1.0mg/L+NAA0.2～0.8mg/L+IBA0.2～0.8mg/L+GA₃0.1～0.8mg/L+矮壮素0.5～1.0mg/L+3％蔗糖+0.75％琼脂的琼脂固体培养基上进行增殖和生根；

(3)试管苗移栽：试管苗出瓶移栽前，将根叶俱全的幼苗分成单株，出瓶的幼苗先用500～800倍的多菌灵或代森锰锌浸泡10～15分钟，随后将幼苗移至有顶玻璃的移栽容器中，在温度为20～30℃，湿度80～90％的条件下生长，25～30d长出新叶时，既已成活；

(4)大田块茎繁育：将移栽成活的幼苗，在自然条件炼苗3～5d后，移栽至大田进行块茎繁育。

步骤(1)使用的培养基优选：MS大量+2×MS微量+MS有机+MS铁盐+6-BA3.0mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.2mg/L+GA₃0.1mg/L+3％蔗糖+0.75％琼脂。或者优选：MS大量+2×MS微量+MS有机+MS铁盐+6-BA3.0mg/L+NAA0.6mg/L+IBA0.3mg/L+GA₃0.3mg/L+3％蔗糖+0.75％琼脂。

步骤(1)中将无菌试管苗外植体叶片按1～2cm×1～2cm分成小块。每瓶一般接种6-10块。

步骤(2)使用的培养基优选：MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.2mg/L+GA₃0.1mg/L+矮壮素1.0mg/L+3％蔗糖+0.75％琼脂。或者优选：MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.3mg/L+IBA0.3mg/L+GA₃0.1mg/L+矮壮素1.0mg/L+3％蔗糖+0.75％琼脂。

步骤(1)叶片诱导出的不定芽增殖生根时，新芽茎段或顶芽去掉新叶，再分成1节1芽转入增殖生根培养基中增殖生根。去掉的新叶又按照步骤(1)的方法接种。增殖生根时每隔25～30d继代一次。

步骤(1)和(2)的培养温度为24℃±2，1000～2000lx弱光环境中，每天10～12小时光照培养。