[发明专利]一种热稳定性提高的淀粉酶突变体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种热稳定性提高的淀粉酶突变体，其特征在于，相对于具有SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的淀粉酶，有一个或者多个氨基酸突变成缬氨酸。

2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述发生突变的氨基酸位于淀粉酶蛋白结构的内表面。

3.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述发生突变的氨基酸是以下氨基酸中的一个或者多个：第66位丝氨酸、第349位谷氨酰胺或第438位丝氨酸。

4.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述1个氨基酸突变是淀粉酶第66位丝氨酸替换成缬氨酸、第349位谷氨酰胺替换成缬氨酸或第438位丝氨酸替换为缬氨酸，所得单突变体分别命名为S66V、Q349V、S438V。

5.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述多个氨基酸突变是第66位丝氨酸替换成缬氨酸、第349位谷氨酰胺替换成缬氨酸及第438位丝氨酸替换为缬氨酸，所得三重突变体命名为S66V/Q349V/S438V。

6.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，同时还有多个氨基酸突变成精氨酸；所述氨基酸突变是以下9个位点的氨基酸同时发生突变：第66位丝氨酸替换成缬氨酸、第98位赖氨酸替换成精氨酸、第166位天冬酰胺替换成精氨酸、第192位赖氨酸替换成精氨酸、第258位丝氨酸替换成精氨酸、第275位天冬酰胺替换成精氨酸、第317位谷氨酰胺替换成精氨酸、第349位谷氨酰胺替换成缬氨酸和第438位丝氨酸替换为缬氨酸，所得9重突变体命名为S66V/K98R/N166R/K192R/S258R/N275R/Q317R/Q349V/S438V。

7.一种权利要求1-6所述任一淀粉酶突变体的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

1)根据SEQ ID NO.1所示氨基酸序列，采用化学全合成的方法全合成基因后克隆到质粒pET-22b(+)中，构建重组质粒pAmyQ；

2)利用Swiss-model软件对氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的酶的结构进行模拟，获得淀粉酶空间结构，确定在淀粉酶催化结构域内进行氨基酸替换的位点；

3)设计突变引物，通过PCR对淀粉酶基因序列进行定点突变，获得含有突变淀粉酶序列的重组载体；

4)将突变后重组载体转化大肠杆菌BL21，诱导表达，离心收集发酵上清，获得淀粉酶突变体。

8.权利要求1-6所述任一淀粉酶突变体在纺织、洗涤剂、制革、造纸、医药、食品领域的应用。