[发明专利]基于锰过氧化物酶的工程菌及其实现方法

权利要求书

1.一种锰过氧化物酶的工程菌，其特征在于，该工程菌为外源表达锰过氧化物酶的大肠杆菌； 

所述的胞内锰过氧化物酶具体为灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)JSD‐1锰过氧化物酶基因SG‐MNP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，编码该锰过氧化物酶核苷酸序列为2226 bp，共编码741个氨基酸。 

2.根据权利要求1所述的工程菌，其特征是，所述的灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)JSD‐1，现保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.5706，保藏日期为2012年1月9日。 

3.一种根据权利要求1或2中所述的工程菌的实现方法，其特征在于，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点和聚组氨酸标签的引物进行PCR扩增得到编码锰过氧化物酶的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列连接到表达载体pET‐22b(+)，再将获得的连接产物转入大肠杆菌表达菌株内，获得锰过氧化物酶过表达重组菌株。 

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述的含有酶切位点和聚组氨酸标签的引物，即含有Msc I和EcoR I酶切位点引物，具体包括： 

MNP‐Msc I‐F：GATGGCCATGACCGAGAACCATGACGCGAT 

MNP‐EcoR I‐R：GGAATTCTCAATGATGATGATGATGATGGACGAGGTCGAACCGGTCGA。 

5.根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述的PCR扩增的条件为：98℃预变性3min；98℃变性10s，68℃延伸45s；30个循环后68℃终延伸3min。 

6.根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述的大肠杆菌表达菌株为Transetta(DE3)大肠杆菌。 

7.一种根据上述任一权利要求所述的锰过氧化物酶的工程菌的应用，其特征在于，将其用于锰过氧化物酶的体外高效表达，并用于降解木质纤维素。