[发明专利]基于木质素过氧化物酶的工程菌及其实现方法

权利要求书

1.一种木质素过氧化物酶的工程菌，其特征在于，该工程菌为外源表达木质素过氧化物酶的大肠杆菌； 

所述的胞内木质素过氧化物酶具体为灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)JSD‐1木质素过氧化物酶基因SG‐LIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，编码该木质素过氧化物酶核苷酸序列为1278bp，共编码425个氨基酸。 

2.根据权利要求1所述的工程菌，其特征是，所述的灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)JSD‐1，现保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.5706，保藏日期为2012年1月9日。 

3.一种根据权利要求1或2中所述的工程菌的实现方法，其特征在于，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点和谷胱甘肽标签的引物进行PCR扩增得到编码木质素过氧化物酶的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列连接到表达载体pET‐41a(+)，再将获得的连接产物转入大肠杆菌表达菌株内，获得木质素过氧化物酶过表达重组菌株。 

4.根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述的含有酶切位点和谷胱甘肽标签的引物，即含有Spe I和EcoR I酶切位点引物，具体包括： 

Lip‐Spe I‐F:GACTAGTATGGCTGACCCTTCCCTGTCGCA 

Lip‐EcoR I‐R:GGAATTCTCACCCCTCCAGCAGCGCCTGAC。 

5.根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述的PCR扩增的条件为：98℃预变性3min；98℃变性10s，68℃延伸45s；30个循环后68℃终延伸3min。 

6.根据权利要求3所述的方法，其特征是，所述的大肠杆菌表达菌株为Transetta(DE3)大肠杆菌。 

7.一种根据上述任一权利要求所述的木质素过氧化物酶的工程菌的应用，其特征在于，将其用于木质素过氧化物酶的体外高效表达，并用于木质素过氧化物酶的规模化发酵生产。