[发明专利]一种白英愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及组培条件下白英悬浮细胞的培养，属于植物技术领域。

背景技术

白英，Solanum lyratum Thunb，茄科，多年生草质藤本，又名山甜菜、白草、白幕、排风、排风草、天灯笼、和尚头草。产于甘肃、陕西，山西、河南、山东、江苏、浙江、安徽、江西、福建、台湾、广东、广西、湖南、湖北、四川、云南诸省。日本、朝鲜、中南半岛也有分布。生于海拔600-2800米的山谷草地或路旁、田边。喜温暖湿润的环境，耐旱、耐寒、怕水涝。对土壤要求不严，但以土层深厚，疏松肥沃，富含有机质的沙壤土为好。重粘土、盐碱地、低洼地不宜种植。茎及果实含有茄碱，果皮含有花色甙及其甙元。功效主治：清热利湿，解毒消肿，抗癌。全草：用于感冒发热，黄疸性肝炎，胆囊炎，胆石病，癌症，子宫糜烂，白带，肾炎水肿；外用治痈疖肿毒。根：用于风湿性关节炎。目前的繁殖方法为种子及分根繁殖，其组培快繁技术尚无研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供白英细胞悬浮培养的快速繁殖方法，细胞生长速度快，遗传性状稳定，操作简单且易控，可以获得大量白英愈伤组织及悬浮细胞，并有效降低生产成本。

为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：

取白英幼嫩的叶片，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污渍，流水冲洗20min，超净工作台上氯化汞处理8min，无菌水冲洗5-7遍，将灭菌处理过的白英叶片接入培养基配方为SH+NAA0.2mg/L+2ip1mg/l+水解酪蛋白250mg/L诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，附加蔗糖3%，琼脂6g/L，PH5-6，暗室培养，继代几次后培养出来的松散的愈伤组织接入液体培养基SH+2，4-D0.2mg/L+KT0.3mg/L+磷酸钙，取单一，松散的愈伤组织接种到盛有30mL培养基的100ml三角瓶中，接种后进行摇床水平振荡培养，可变速率95r/min，温度30℃，振幅2-4cm附加蔗糖3%，PH6，光照3000lx，培养温度27℃，取悬浮培养出来的细胞接种在1mm厚的薄层固体培养基上进行平板培养，每个细胞团均来自一个细胞，然后对这些细胞株进行鉴定检测，筛选出次生代谢物含量高的细胞株进行大规模生产培养。

采用本发明制备的白英悬浮细胞，生长速度快，操作简单，能耗小，污染小。

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

取白英幼嫩的叶片，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污渍，流水冲洗20min，超净工作台上氯化汞处理8min，无菌水冲洗5-7遍，将灭菌处理过的白英叶片接入培养基配方为SH+NAA0.2mg/L+2ip1mg/l+水解酪蛋白250mg/L诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，附加蔗糖3%，琼脂6g/L，PH5-6，暗室培养，继代几次后培养出来的松散的愈伤组织接入液体培养基SH+2，4-D0.1mg/L+KT0.2mg/L+磷酸钙，取单一，松散的愈伤组织接种到盛有30mL培养基的100ml三角瓶中，接种后进行摇床水平振荡培养，可变速率95r/min，温度30℃，振幅2-4cm附加蔗糖3%，PH6，光照3000lx，培养温度27℃，取悬浮培养出来的细胞接种在1mm厚的薄层固体培养基上进行平板培养，每个细胞团均来自一个细胞，然后对这些细胞株进行鉴定检测，筛选出次生代谢物含量高的细胞株进行大规模生产培养。

实施例2

取白英幼嫩的叶片，先在漂白粉中浸泡3min，毛刷去除表面污渍，流水冲洗20min，超净工作台上氯化汞处理8min，无菌水冲洗5-7遍，将灭菌处理过的白英叶片接入培养基配方为SH+NAA0.2mg/L+2ip1mg/l+水解酪蛋白250mg/L诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，附加蔗糖3%，琼脂6g/L，PH5-6，暗室培养，继代几次后培养出来的松散的愈伤组织接入液体培养基SH+2，4-D0.2mg/L+KT0.4mg/L+磷酸钙，取单一，松散的愈伤组织接种到盛有30mL培养基的100ml三角瓶中，接种后进行摇床水平振荡培养，可变速率95r/min，温度30℃，振幅2-4cm附加蔗糖3%，PH6，光照3000lx，培养温度27℃，取悬浮培养出来的细胞接种在1mm厚的薄层固体培养基上进行平板培养，每个细胞团均来自一个细胞，然后对这些细胞株进行鉴定检测，筛选出次生代谢物含量高的细胞株进行大规模生产培养。

实施例3