[发明专利]一种乌饭树悬浮细胞培养的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及乌饭树悬浮细胞培养的快繁方法，属于植物技术领域。

背景技术

乌饭树，杜鹃花科，Vaccinium bracteatum，常绿灌木，又名南烛，西烛叶、乌米饭、苞越桔等，广布于长江以南各省区，福建、浙江、江苏、安徽、江西、湖南、湖北、广东，南至台湾、广东（海南岛）；朝鲜，越南，日本，泰国也有，多生于山坡灌木丛或马尾松林内，向阳山坡路旁，多生长在酸性土壤中。喜光、耐旱、耐寒、耐瘠薄，适生范围较广，我国大部分地区均可种植。是不可多得的制作盆景、盆栽的优良素材。繁殖多以扦插和播种为主。果:酸、甘、平，无毒，强筋，益气，固精。枝叶:苦、平，无毒。根：主治跌打损伤肿痛，鲜根捣烂水煎外洗。散瘀，消肿，止痛，治牙痛，组培方法研究目前尚处于起步阶段，悬浮细胞培养还无人研究，悬浮细胞具有操作简单可控，生产成本低，繁殖率高等优点。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种乌饭树悬浮细胞的快速繁殖方法，由该方法所制备得到的乌饭树悬浮细胞生长分裂速度快，操作工艺简单可控，有助于获得大量的药用次生代谢产物，且生长周期短。

本发明所要解决的技术问题是通过以下方案来实现的：

取乌饭树近芽处幼嫩的叶片，在漂白粉中浸泡2min，毛刷去除表面被毛和污垢，流水冲洗20min，超净工作台上10%安替福民溶液消毒8min，同时均匀摇动，无菌水冲洗6-7遍，吸水纸吸去表面水分，消毒处理过的叶片接种入改良MS+2,4-D4mg/L+6-BA0.4mg/L+活性炭1g/L+3%蔗糖+0.65%琼脂培养基中进行愈伤组织诱导，光照强度800lx，光期6h，暗期18h，诱导出来的乌饭树愈伤组织接入改良MS+CH200mg/L+IAA0.3mg/L+ IBA0.2mg/L+6-BA2mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂进行愈伤组织的增殖，pH5.8，光照2000lx，温度28℃，增殖后的愈伤组织筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基改良MS+硫代硫酸钠8mg/L+IAA3mg/L+2ip0.1mg/L+5mL/L蜂蜜，45继代三次后称重。

采用本发明制备的乌饭树悬浮细胞生长分裂速度快，操作工艺简单可控，有助于获得大量的药用次生代谢产物，且生长周期短。

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

取乌饭树近芽处幼嫩的叶片，在漂白粉中浸泡2min，毛刷去除表面被毛和污垢，流水冲洗20min，超净工作台上10%安替福民溶液消毒8min，同时均匀摇动，无菌水冲洗6-7遍，吸水纸吸去表面水分，消毒处理过的叶片接种入改良MS+2,4-D3mg/L+6-BA0.4mg/L+活性炭1g/L+3%蔗糖+0.65%琼脂培养基中进行愈伤组织诱导，光照强度800lx，光期6h，暗期18h，诱导出来的乌饭树愈伤组织接入改良MS+CH200mg/L+IAA0.3mg/L+ IBA0.2mg/L+6-BA1mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂进行愈伤组织的增殖，pH5.8，光照2000lx，温度28℃，增殖后的愈伤组织筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基改良MS+硫代硫酸钠8mg/L+IAA3mg/L+2ip0.05mg/L+5mL/L蜂蜜，45继代三次后称重。

实施例2

取乌饭树近芽处幼嫩的叶片，在漂白粉中浸泡2min，毛刷去除表面被毛和污垢，流水冲洗20min，超净工作台上10%安替福民溶液消毒8min，同时均匀摇动，无菌水冲洗6-7遍，吸水纸吸去表面水分，消毒处理过的叶片接种入改良MS+2,4-D5mg/L+6-BA0.4mg/L+活性炭1g/L+3%蔗糖+0.65%琼脂培养基中进行愈伤组织诱导，光照强度800lx，光期6h，暗期18h，诱导出来的乌饭树愈伤组织接入改良MS+CH200mg/L+IAA0.3mg/L+ IBA0.2mg/L+6-BA2mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂进行愈伤组织的增殖，pH5.8，光照2000lx，温度28℃，增殖后的愈伤组织筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基改良MS+硫代硫酸钠8mg/L+IAA3mg/L+2ip0.1mg/L+5mL/L蜂蜜，45继代三次后称重，计算增殖率。

实施例3

取乌饭树近芽处幼嫩的叶片，在漂白粉中浸泡2min，毛刷去除表面被毛和污垢，流水冲洗20min，超净工作台上10%安替福民溶液消毒8min，同时均匀摇动，无菌水冲洗6-7遍，吸水纸吸去表面水分，消毒处理过的叶片接种入改良MS+2,4-D4mg/L+6-BA0.4mg/L+活性炭1g/L+3%蔗糖+0.65%琼脂培养基中进行愈伤组织诱导，光照强度800lx，光期6h，暗期18h，诱导出来的乌饭树愈伤组织接入改良MS+CH200mg/L+IAA0.3mg/L+ IBA0.2mg/L+6-BA2mg/L+3%蔗糖+0.65%琼脂进行愈伤组织的增殖，pH5.8，光照2000lx，温度28℃，增殖后的愈伤组织筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基改良MS+硫代硫酸钠8mg/L+IAA3mg/L+2ip0.05mg/L+5mL/L蜂蜜，45继代三次后称重，计算增殖率。