[发明专利]一种九里香悬浮细胞的快速繁殖方法在审
申请号: | 201410463221.2 | 申请日: | 2014-09-12 |
公开(公告)号: | CN104255478A | 公开(公告)日: | 2015-01-07 |
发明(设计)人: | 杨存 | 申请(专利权)人: | 南京通泽农业科技有限公司 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 210046 江苏省南京市*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 九里香 悬浮 细胞 快速 繁殖 方法 | ||
1. 一种九里香悬浮细胞的快速繁殖方法,包括九里香无菌叶片的消毒、愈伤组织的诱导、液体悬浮细胞的培养、悬浮细胞培养的优化,其主要步骤如下:
(1)取九里香幼嫩的叶片,进行消毒处理;
(2)取步骤(1)消毒处理过的九里香幼嫩的叶片接入MSB+IAA1.0mg/L+6-BA10mg/L+2mg/LKT培养基中进行愈伤组织诱导,附加蔗糖30g/L,琼脂7g/L,pH5.8,暗室培养,温度25℃,相对湿度75%;
(3)取步骤(2)诱导出来的愈伤组织放入液体培养基MSB+4-5μmol/L2,4-D+1-1.5μmol/L6-BA进行液体悬浮细胞培养,附加蔗糖50g/L,pH5.8,光照4500lx,温度25℃;
(4)取步骤(3)悬浮培养两周后的出来的细胞放入附加了醋酸钠10mg/L+苯丙酸钠10mg/L的液体培养基中。
2. 按照权利要求1所述的一种九里香悬浮细胞的快速繁殖方法,其特征在于:步骤(1)中所述九里香无菌叶片的获得为取九里香幼嫩的叶片,流水冲洗20min,超净工作台上0.1%的升汞处理8min,无菌水冲洗5次,吸水纸吸干。
3. 按照权利要求1所述的一种九里香悬浮细胞的快速繁殖方法,其特征在于:步骤(3)中九里香悬浮细胞培养的条件为无菌抽滤后接种密度为8%,125ml药瓶装25ml培养基,转速110r/min,培养周期为30d。
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