[发明专利]一种鸦胆子悬浮细胞培养的快速繁殖方法

权利要求书

1. 一种鸦胆子悬浮细胞培养的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养，其主要步骤如下：

（1）采取鸦胆子近芽处幼嫩的叶片，在超净工作台上对其进行消毒处理；

（2）取步骤（1）消毒处理过的叶片接种入MS+NAA0.2mg/L+KT1.0mg/L+链霉素15mg/L培养基中进行愈伤组织诱导，附加6.5g/L琼脂，30g/L蔗糖，光照强度1000lx，光期6h，暗期18h；

（3）取步骤（2）中诱导出来的鸦胆子愈伤组织接入MS+ABA1.5mg/L+IAA0.3mg/L+GA₃1.5mg/L+1g/L柠檬酸，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照1000lx，温度25-28℃；

（4）取步骤（3）增殖后的愈伤组织筛选嫩绿松散的愈伤组织接入液体培养基MS+NAA0.05-0.2mg/L+TDZ0.1-0.5mg/L+3-5mmol/L叶酸+500mg/L椰乳，5周后称重计算增殖率。

2. 按照权利要求1所述的一种鸦胆子悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（1）中所述鸦胆子无菌叶片的获得为，取鸦胆子近芽处幼嫩的叶片，在漂白粉中浸泡2min，毛刷去除表面被毛和污垢，流水冲洗20min，超净工作台上次氯酸钠消毒9min，同时均匀摇动，无菌水冲洗6-7遍，吸水纸吸去表面水分。

3. 按照权利要求1所述的一种鸦胆子悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（2）诱导培养基中附加了链霉素15mg/L，可防止外植体本身内生菌的产生。

4. 按照权利要求1所述的一种鸦胆子悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（3）增殖培养中附加了赤霉素和柠檬酸，分别可以促进愈伤组织的生长和愈伤组织的褐化，且都采用过滤灭菌。

5. 按照权利要求1所述的一种鸦胆子悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（4）悬浮细胞培养中附加了叶酸和椰乳，可以促进悬浮细胞的生长。

6. 按照权利要求1所述的一种鸦胆子悬浮细胞培养的快速繁殖方法，其特征在于：步骤（4）悬浮细胞培养采用摇床对其进行水平震荡培养，震荡频率90r/min，每60ml悬浮液接种入150ml三角瓶中。