[发明专利]基于荧光金纳米团簇的脲酶抑制剂测定方法

权利要求书

1.一种基于荧光金纳米团簇的脲酶抑制剂测定方法,其特征是利用脲酶特异性催化尿素生成氨和二氧化碳的体系，新生成的氨能提高所述体系的pH值，使N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇的荧光发生猝灭，而脲酶抑制剂能阻止脲酶催化尿素分解这一过程，抑制荧光猝灭，从而用于脲酶抑制剂的检测。

2.根据权利要求1所述的基于荧光金纳米团簇的脲酶抑制剂测定方法，其特征是所使用的N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸还原氯金酸的方法制备：将浓度为0.02~0.18 mol/L 的N-乙酰-L-半胱氨酸溶液和浓度为0.1~0.8 mol/L的氢氧化钠溶液加入到浓度为0.01~0.1 g/L的氯金酸溶液中，混匀，置于20~70°C水浴恒温反应0~3.5小时，反应结束后用截留分子量为3500的透析袋对反应液进行透析纯化处理，得到N-乙酰-L-半胱氨酸-金纳米团簇荧光材料水溶液。

3.根据权利要求1所述的基于荧光金纳米团簇的脲酶抑制剂测定方法，其特征是所使用的N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸还原氯金酸的方法制备：将0.6 mL浓度为0.5 mol/L的氢氧化钠溶液与0.4 mL浓度为0.02 g/L的氯金酸溶液加入到4 mL浓度为0.08 mol/L的N-乙酰-L-半胱氨酸溶液中，混匀，置于37°C恒温水浴槽中反应2.5 h，反应液由浅黄色变为无色，反应结束后用截留分子量为3500的透析袋对反应液进行纯化处理，纯化后的金纳米团簇溶液放置于4°C冰箱避光保存。

4.根据权利要求2或3所述的基于荧光金纳米团簇的脲酶抑制剂测定方法，其特征是利用N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇在650 nm处的发射光强度值（F₆₅₀）以判断脲酶抑制剂对脲酶活性的抑制作用，所使用的激发波长为355 nm。

5.根据权利要求2或3所述的基于荧光金纳米团簇的脲酶抑制剂测定方法，其特征是将0.05 mL浓度为1.5 U/mL、pH=6.0的脲酶溶液加入到0.2 mL含有不同浓度脲酶抑制剂的1 mol/L、pH=6.0的尿素溶液中，混合均匀后在25 °C的恒温水浴槽中反应40 min，将0.2 mL的N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇溶液加入到上述反应液中，在25 °C的恒温水浴槽中反应3 min，测定发射光强度值F₆₅₀值，计算抑制率，通过软件拟合得到脲酶抑制剂的IC₅₀。

6.一种基于荧光金纳米团簇的脲酶抑制剂测定方法，其特征是将0.05 mL浓度为1.5 U/mL、pH=6.0的脲酶溶液加入到0.2 mL含有不同浓度巯基乙胺的1 mol/L、pH=6.0尿素溶液中，混合均匀后在25 °C的恒温水浴槽中反应40 min，将0.2 mL的N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇溶液加入到上述反应液中，再在25 °C的恒温水浴槽中反应3 min，测定发射光强度值F₆₅₀值，计算抑制率，通过软件拟合得到巯基乙胺的IC₅₀为2.8 μmol/L。

7.一种基于荧光金纳米团簇的脲酶抑制剂测定方法，其特征是将0.05 mL浓度为1.5 U/mL、pH=6.0的脲酶溶液加入到0.2 mL含有不同浓度对苯醌的1 mol/L、pH=6.0的尿素溶液中，混合均匀后在25 °C的恒温水浴槽中反应40 min，将0.2 mL的N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇溶液加入到上述反应液中，在25 °C的恒温水浴槽中反应3 min，测定发射光强度值F₆₅₀值，计算抑制率，通过软件拟合得到对苯醌的IC₅₀为11.9 μmol/L。

8.根据权利要求6或7所述的基于荧光金纳米团簇的脲酶抑制剂测定方法，其特征是所使用的N-乙酰-L-半胱氨酸保护的金纳米团簇采用N-乙酰-L-半胱氨酸还原氯金酸的方法制备：将0.6 mL浓度为0.5 mol/L的氢氧化钠溶液与0.4 mL浓度为0.02 g/L的氯金酸溶液加入到4 mL浓度为0.08 mol/L的N-乙酰-L-半胱氨酸溶液中，混匀，置于37°C恒温水浴槽中反应2.5 h，反应液由浅黄色变为无色，反应结束后用截留分子量为3500的透析袋对反应液进行纯化处理，纯化后的金纳米团簇溶液放置于4°C冰箱避光保存。