[发明专利]一种复合型荧光纳米探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种复合型荧光纳米探针，其特征在于：以金纳米笼作为载体，其内部载有荧光分子，其表面被组装上DNA分子开关，可将金纳米笼孔封堵，防止荧光分子外泄；其中，所述的DNA分子开关由3种DNA组成，其中DNA1和DNA2分别与DNA3互补。

2.一种如权利要求1所述的复合型荧光纳米探针，其特征在于：所述的DNA3不但含有切口酶识别序列还含有与引物链DNA4互补的序列。

3.一种如权利要求1-2中任一项所述的复合型荧光纳米探针，其特征在于：

所述的DNA1的部分序列为：5’-GGT CCA GCT GGC TTT TTT---SH-3’；

所述的DNA2的部分序列为：5’-SH---TTT TTT CCG TCG CAC GCT TTT-3’；

所述的DNA3的部分序列为：5’-GCC AGC TGG ACC TG GCT AAG GCA GCG TGC GAC GGT GGG GGA-3’；

所述的引物链DNA4的部分序列为：5’-AAT ACT CCC CCA CCG-3’。

4.一种如权利要求1-3中任一项所述的复合型荧光纳米探针，其特征在于：所述的荧光分子是罗丹明B。

5.一种如权利要求1-4中任一项所述的复合型荧光纳米探针的制备方法，其特征在于步骤如下：

(1)分别在DNA1、DNA2中加入DTT溶液进行活化处理1h；

(2)在磁珠-金纳米笼的复合物中加入活化好的DNA1、DNA2溶液，室温振荡过夜，使DNA1、DNA2组装到金纳米笼表面；

(3)磁分离上述溶液，用PBS缓冲溶液清洗后加入罗丹明B溶液，室温振荡过夜；

(4)向上述溶液中加入DNA3溶液，室温下反应2h，使DNA3分别与与DNA1和DNA2杂交，在金纳米笼表面形成DNA分子开关，磁分离，用PBS缓冲溶液清洗后重新分散，即制得复合型荧光纳米探针；

其中，所述的磁珠-金纳米笼的复合物按如下方法制备而成：将磁珠与金纳米笼的混合溶液置于室温振荡反应10h，磁分离，用PBS缓冲溶液清洗，移除上清夜，即得。

6.一种如权利要求1-4中任一项所述的复合型荧光纳米探针的应用，其特征在于用于ATP的检测，方法如下：

(1)在ATP适体复合物中加入ATP样品溶液，37℃恒温振荡反应1h，ATP与ATP适体特异性结合，将引物DNA4竞争下来；

(2)磁分离上述溶液，取上清液加入到如权利要求1-4中任一项所述的复合型荧光纳米探针的PBS悬浮液中，使被竞争下来的引物DNA4与DNA3杂交，室温下反应后再加入Klenow聚合酶、dNTPs、Nb.Bpu10I切口酶及PBS缓冲溶液，37℃条件下反应2h，发生DNA链增长、链取代及链剪切的循环反应，使DNA分子开关不断被打开，释放出荧光分子；

(3)磁分离上述溶液，收集上清液，检测其荧光信号；

其中，所述的ATP适体复合物按如下方法制备而成：将羧基磁珠与氨基修饰的ATP适体溶液混合，室温振荡过夜，磁分离，移除上清液，加入引物DNA4，37℃恒温振荡反应1h，生成由引物DNA4和ATP适体杂交而成的双链结构，磁分离，即得。