[发明专利]一种基于CdS-Fe3O4电致化学发光传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于CdS-Fe₃O₄电致化学发光传感器的制备方法及应用。具体涉及一种CdS作为发光材料，CdS-Fe₃O₄作为捕获抗体基底的电化学发光传感器的制备与应用，属于电化学发光检测技术领域。

背景技术

真菌毒素是广泛存在于自然界的农产品污染物，真菌毒素具有强烈的肾脏毒性，肝脏毒性和神经毒性，并且有致畸、致癌和致突变作用。真菌毒素的存在对人类和动物健康以及畜牧业发展构成了巨大的威胁。激素是由人和动物某些细胞合成和分泌、能调节机体生理活动的特殊物质，和神经系统一起调节人体的代谢和生理功能。正常情况下各种激素是保持平衡的，如因某种原因使这种平衡打破了这就造成内分泌失调，会引起相应的临床表现。因此，可利用测定真菌毒素和激素的含量来判断农产品污染状况及疾病诊断。

目前真菌毒素和激素的检测方法主要是色谱分析和免疫分析法，例如薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法。虽然色谱分析灵敏度很高，但是色谱分析需要繁琐的样品预处理、预富集、仪器操作步骤复杂等缺点。为了克服以上色谱分析方法的缺点，本发明设计了一种简单、快速、灵敏度和选择性高的电致化学发光免疫分析方法。

本发明利用CdS量子点为电致化学发光信号源，CdS量子点通过共价键固载在介孔四氧化三铁表面制得抗体捕获基底，利用介孔四氧化三铁优良的生物兼容性和大的比表面积将抗体固载在CdS-Fe₃O₄表面。在本发明中制备的电致化学发光传感器具有操作简单，成本低，灵敏度高，特异性高等优点，克服了色谱分析的一些不足。

发明内容

本发明的目的是针对现有的真菌毒素和激素检测方法存在的问题，提供一种简单快速可靠的CdS-Fe₃O₄量子点电致化学发光传感器的制备方法和应用，实现对真菌毒素和激素的灵敏、特异、快速、高效检测。

本发明的技术方案如下：

1. 一种基于CdS-Fe₃O₄电致化学发光传感器的制备方法

（1）将直径4 mm的玻碳电极依次用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化铝抛光粉依次做抛光处理，然后用乙醇超声清洗，再用超纯水冲洗干净；

（2）滴涂4 μL、0.5~2 mg mL^-1的Ab-CdS-Fe₃O₄抗体孵化溶液于电极表面，4℃保存至干燥；

（3）滴加4 μL、质量分数为1~3%的牛血清白蛋白溶液，以封闭电极表面的非特异性活性位点，用pH6.4~8.4的PBS缓冲溶液冲洗电极表面，4℃晾干；

（4）滴加4 μL待测物溶液，用pH6.4~8.4的PBS缓冲溶液冲洗电极表面，放置在4℃的冰箱中孵化3~12 h晾干，制得一种基于CdS-Fe₃O₄电致化学发光传感器的制备方法。

2.上述所述的Ab-CdS-Fe₃O₄抗体孵化溶液的制备

在CdS-Fe₃O₄纳米复合物溶液中，加入1 mL、0.4～0.6mol/L的EDC溶液混合，加入1 mL、0.09～0.13 mol/L的NHS溶液，利用EDC和NHS活化CdS-Fe₃O₄表面的羧基，加入10～100μL、1 mg/mL待测物抗体Ab溶液，混合，在4℃下振荡孵化24 h，磁分离，去除上清液，然后将其分散在1 mL、pH 7.4 的PBS缓冲溶液，制得Ab-CdS-Fe₃O₄抗体孵化溶液，储存在4℃的冰箱中备用。

3. 上述所述的CdS-Fe₃O₄纳米复合物溶液的制备

（1）巯基乙酸稳定的CdS量子点溶液的制备

将250 μL巯基乙酸加入到50 mL、5～15mmol/L的CdCl₂水溶液中，通氮气25～40 min以除去溶液中的氧气；在氮气保护下，加热至100～120℃，用1.0 mol/L的NaOH溶液调pH为11；加入5.5 mL、0.07～0.3mol/L的Na₂S溶液，继续搅拌4 h；冷却至室温，制得巯基乙酸稳定的CdS量子点溶液，4℃储存；